[发明专利]一株分泌抗TIGIT单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一株分泌抗TIGIT单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，所述分泌抗TIGIT单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为鼠抗人TIGIT单克隆抗体杂交瘤细胞系MJ12‑30，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45102，保藏日期为2022年02月24日。所述杂交瘤细胞分泌的抗TIGIT单克隆抗体与TIGIT蛋白具有较高的亲和力。以抗TIGIT单克隆抗体构建的TIGIT检测试剂盒灵敏度高、特异性好，在包括酶联免疫吸附、蛋白免疫印迹、免疫组织化学、流式细胞术和免疫荧光等在内的多种检测中应用效果较好。

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，涉及一株分泌抗TIGIT单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

TIGIT的全称为T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白（T-cell immunoreceptorwith Ig and ITIM domains），又名VSIG9或VSTM3。TIGIT是一种优先在NK、CD8⁺T、CD4⁺T细胞以及调节性T细胞（Treg cell，简称“Treg”）上表达的免疫共抑制受体，属于免疫球蛋白超家族的成员。TIGIT是一种跨膜蛋白，具有细胞外Ig可变结构域、一个跨膜结构域和胞内区，所述胞内区含有免疫受体酪氨酸抑制基序（ITIM）和免疫球蛋白尾部酪氨酸（ITT）样基序。TIGIT主要表达于淋巴细胞中，特别是在效应CD4⁺T细胞、调节性CD4⁺T细胞、滤泡辅助CD4⁺T细胞、效应CD8⁺T细胞和自然杀伤细胞（NK细胞）中高表达，同时在黑色素瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、结肠腺癌、胃癌、急性髓细胞性白血病和多发性骨髓瘤组织中异常高表达。

目前TIGIT已知的配体有CD155、CD112/PVRL2和CD113/PVRL3。其中TIGIT与CD155/PVR的亲和力最强，其次是CD113/PVRL3和CD112/PVRL2。CD155是一种免疫球蛋白超家族黏附分子，主要在树突状细胞、T细胞、B细胞和巨噬细胞的表面表达，也在很多肿瘤细胞上高表达。肿瘤表面高表达的CD155与NK和T细胞表面的TIGIT结合，可以减弱DC细胞的抗原呈递功能，向T细胞和NK细胞内部传递抑制性信号，从而在一定程度上抑制对肿瘤细胞的杀伤作用。总而言之，TIGIT信号通路在肿瘤细胞逃脱免疫监视的过程中发挥了重要作用，当其在调节T细胞上表达时，可以通过增强信号通路来调节T细胞的抑制功能，从而抑制多种免疫细胞的活性。

临床结果表明，TIGIT和CD155在结直肠癌组织中的表达量明显高于癌旁组织，且TIGIT和CD155的表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化及病理分期具有显著的相关性，随着分期增高，TIGIT和CD155的表达水平显著上调。由此推断，TIGIT和CD155的表达水平与结直肠癌的进展显著相关，说明TIGIT和CD155可以作为评估结直肠癌预后的生物学标志物。

CD155和PD-L1在接受治疗的头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）患者的骨髓源性抑制细胞（MDSCs）中高表达，与肿瘤CD3呈负相关。单用抗PD-L1治疗可上调MDSCs中CD155的表达，而抗TIGIT治疗可上调MDSCs中PD-L1的表达。

联合阻断TIGIT/CD155和PD-1/PD-L1信号对小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用，增强了效应T细胞和细胞因子分泌的百分率，诱导了免疫记忆效应。

TIGIT和PD-1的表达量与肿瘤浸润性CD8⁺T细胞呈显著正相关，可能是影响胃癌患者预后的危险因素。TIGIT在胃癌肿瘤微环境中高表达可以抑制肿瘤浸润性CD8⁺T细胞的功能，导致胃癌细胞逃避免疫杀伤。联合阻断TIGIT、PD-1和T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3（Tim-3），可增强Wilms肿瘤蛋白-1（WT-1）特异性CD8⁺T细胞的生长、增殖和细胞因子的产生，以恢复肿瘤诱导的T细胞功能障碍，并促进晚期胃癌患者的抗肿瘤CD8⁺T细胞反应。