[发明专利]一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法

权利要求书

1.一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：选择小鼠为实验对象，对实验小鼠采用病理化处理；

步骤二：实验对象病理化检测，筛选符合实验要求的病理小鼠；

步骤三：抑制病理小鼠DM系统；

步骤四：骨组织取样；

步骤五：对骨组织采用单克隆抗体检测；

步骤六：分析骨组织甲基乙二醛含量；

步骤七：分析数据结果。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤一中，选取一定数量的小鼠，以糖分、脂肪含量高的饲料对小鼠进行饲养，建立诱发性2型糖尿病小鼠。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤二中，在小鼠饲养阶段定期对小鼠血液组织血糖检测，初步筛选出血糖高于正常标准的小鼠。

4.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤二中，在初步筛选后，采用micro-CT、有限元分析及病理染色方式筛选2型糖尿病小鼠(皮质增厚，小梁减少，小梁间隙增宽)。

5.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤三中，通过MG直接清除、降低MG合成及诱导MG降解酶合成三种途径抑制DM系统，研究MG异常积累引起骨微结构及生物力学改变的阈值范围。

6.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤三中，分别采用MG直接清除、降低MG合成及诱导MG降解酶合成三种方式对2型糖尿病小鼠进行处理，A组采用MG直接清除处理方式，B组采用降低MG合成处理方式，C组采用诱导MG降解酶合成处理方式，D组为空白对照组不做任何处理。

7.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤四中，在抑制病理小鼠DM系统后，取四组实验小鼠同一部位关节软骨的骨细胞组织。

8.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤五中，取出部分骨细胞组织，采用单克隆抗体1H7G5检测骨细胞组织中甲基乙二醛源性咪唑AGEs。

9.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤六中，采用高压输液系统，将抑制病理小鼠DM系统后的骨细胞组织流动相泵入装有固定相的色谱柱，使柱内各成分分离，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，并利用电场和磁场使发生相反的速度色散，将它们分别聚焦而得到质谱图，从而确定甲基乙二醛含量质量。

10.根据权利要求1所述的一种用于治疗糖尿病骨脆性增加的前体产物研究方法，其特征在于：所述步骤七中，根据色谱图中色谱柱确定四组实验中甲基乙二醛含量质量，并统计相应结果，最终获得抑制MG系统的最优路径。