[发明专利]一种非衍生化同步检测血清中17种类固醇激素的试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及激素检测技术领域，尤其是涉及一种非衍生化同步检测血清中17种类固醇激素的试剂盒及其应用。试剂盒包括洗脱液、稀释液、萃取剂、质控品和色谱柱，萃取剂为乙酸乙酯/正己烷；该试剂盒具有简单、方便、高通量、耗时显著缩短的优点，同时检测结果更佳准确；其中采用ID‑LC‑MS/MS(高效液相色谱‑串联质谱)检测血清17种类固醇激素，样品前处理更加简单、方便，仅仅需要一步液液萃取过程，就能有效提取样本中17种类固醇激素，时间大大缩短，不需要衍生化和/或固相提取步骤，通过色谱条件优化，能将生物体内存在的17种类固醇激素实现基线分离，提高了定量的特异性和准确性。

技术领域

本发明涉及激素检测技术领域，尤其是涉及一种非衍生化同步检测血清中17种类固醇激素的试剂盒及其应用。

背景技术

类固醇激素是一类四环脂肪烃类化合物，均具有环戊烷多氢菲母核，又称为甾体激素。在维持生命，调节内分泌功能，机体发展，免疫调节以及疾病治疗和生育控制方面有重要的调节作用。激素的检测在过去是医学实验室检测项目中公认的难题，主要原因是其在血液中含量低、结构类似物众多，因此，对检测方法的灵敏度和特异性要求很高。类固醇激素检测的广泛研究始于20世纪70年代。当时采用的方法主要是放射免疫法(RIA)法。近年来，定量检测血清类固醇激素的方法不断出现，主要有酶联免疫法(EIA)、酶联免疫吸附法(ELSIA)、化学发光法(CLIA)、质谱法(气相色谱串联质谱法和液相色谱串联质谱法)等。

RIA存在放射性核素对人体损害较大并造成环境污染，EIA、ELSIA等由于检测灵敏度较低、精密度较差以及自动化程度不高，逐步被新的CLIA取代，CLIA法是目前临床实验室的常规检测技术。然而以抗原-抗体免疫反应为基础的方法，不可避免的带来了非特异性反应的问题而使得测定结果有明显系统误差，同时各实验室使用不同生产厂家的试剂导致结果可比性差，直接影响了检测结果在疾病筛查中的可信度。基于质谱技术的内分泌疾病生化诊断是目前应用广泛且较为成熟的方法。由于生物样本中存在浓度相当的与类固醇激素分子的色谱性质及质谱碎片性质十分相近，使得其特异性检测难度加大。目前多采用气相色谱质谱联用(GC-MS)分析法检测分析血清中的类固醇激素浓度，但其灵敏度不足，通常需采用衍生化的方法，前处理复杂、分析时间长。

国外虽有少量使用同位素稀释液相色谱串联质谱法(Isotope-Dilution LiquidChromatography-tandem Mass spectrometry，ID-LC-MS/MS)检测血浆中类固醇激素的报道，但仍需要进行衍生化、固相提取等前处理步骤才能将类固醇激素的异构体分开。目前缺乏相应的质谱检测试剂盒应用于临床检测，限制了其在临床上的应用。

因此，开发稳定的基于LC-MS/MS技术的检测类固醇激素的方法，并研制相应的检测试剂盒能够为临床提供更加准确可靠的检测方法，对提高国内内分泌疾病的诊断治疗水平具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种非衍生化同步检测血清中17种类固醇激素的试剂盒及其应用，该试剂盒具有简单、方便、高通量、耗时显著缩短的优点，同时检测结果更佳准确。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一个方面，本发明提供了一种非衍生化同步检测血清中17种类固醇激素的试剂盒，所述试剂盒包括洗脱液、稀释液、萃取剂、质控品和色谱柱，所述萃取剂为乙酸乙酯/正己烷。

需要说明的是，本发明的试剂盒通过萃取剂对样品前处理进行改良，不需要衍生化和/或固相提取过程，前处理更加简单、快捷，可实现批量处理。

优选地，所述萃取剂中乙酸乙酯与正己烷的体积比为0.5-2：1，更优选地，乙酸乙酯与正己烷的体积比为1:1。