[发明专利]一种利用大叶种茶树幼胚组织培养茶苗的茶树繁育方法

说明书

本发明公开了一种利用大叶种茶树幼胚组织培养茶苗的茶树繁育方法，涉及生物技术领域。该繁育方法包括以下步骤：(1)采集云南大叶种茶树的幼果，剥去果皮，取出种子；(2)所述种子剥去种皮，取出幼胚，之后依次接种于愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得到大叶种茶树幼苗；所述愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中均添加半胱氨酸和甘露醇。本发明通过在愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中添加半胱氨酸和甘露醇降低大叶种茶树幼胚组织培养过程中愈伤组织的褐化率，其中半胱氨酸作为褐变抑制剂，甘露醇作为渗透压调节剂，半胱氨酸和甘露醇联合作用，有效降低了愈伤组织的褐化率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种利用大叶种茶树幼胚组织培养茶苗的茶树繁育方法。

背景技术

茶树(Camellia sinensis)是世界上最重要的生产非酒精类饮料的木本植物之一。它生长周期长，自然结实率和杂交结实率都较低，使得常规茶树育种需要20-25年。由于无性繁殖能保持良种的特征特性，后代性状一致性高，有利于茶园管理，近年来备受人们关注，但是目前传统的无性繁殖方法在茶树的生根效果和成活率方面均不理想。

植物组织培养是指利用植物体离体的各种器官、组织或细胞(如根、茎、叶、花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等)，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其它生物产品的一项技术。与传统育种方法相比，植物组织培养有着快速高效、可控性强、利于自动化生产、不受外界环境条件影响等优点，并已应用于植物育种，在增加植物育种变异性、改良植物种性、培育新品种、缩短育种周期、提高育种效率等方面发挥了独特的优势，产生了巨大的经济效益和社会效益。目前，许多研究者对茶树组织培养进行了研究，以茶树营养器官和生殖器官作外植体培养均有成功报道。但云南大叶种茶树因其品种因素，茶多酚含量较高，一般在35％左右，外植体切段易氧化褐死，至今组织培养获得成功的报道并不多见。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用大叶种茶树幼胚组织培养茶苗的茶树繁育方法，以解决上述现有技术存在的问题，使组织培养过程的褐变率降低，提高组织培养成活率。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种利用大叶种茶树幼胚组织培养茶苗的茶树繁育方法，包括以下步骤：

(1)采集云南大叶种茶树的幼果，剥去果皮，取出种子；

(2)所述种子剥去种皮，取出幼胚，之后依次接种于愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中进行培养，得到大叶种茶树幼苗；

所述愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中均添加半胱氨酸和甘露醇。

进一步地，所述半胱氨酸在所述愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中的添加量均为100g/L，所述甘露醇在所述愈伤组织培养基、增殖培养基和生根培养基中的添加量均为6g/L。

进一步地，所述愈伤组织培养基为：MS+0.6mg/L NAA+0.2mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+100g/L半胱氨酸+6g/L甘露醇+6.5g/L琼脂。

进一步地，所述增殖培养基为：MS+1.0mg/L NAA+0.2mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+100g/L半胱氨酸+6g/L甘露醇+6.5g/L琼脂。

进一步地，所述生根培养基为：MS+1.0mg/L NAA+0.2mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+100g/L半胱氨酸+6g/L甘露醇+7.0g/L琼脂。

进一步地，愈伤组织培养、增殖培养和生根培养的光照强度均为1600lx。

进一步地，所述愈伤组织培养、增殖培养和生根培养的温度均为26℃。光照时间为10h/d。