[发明专利]一种培养复发胃癌类器官的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种复发性胃癌肿瘤类器官的培养基及其培养方法。通过调整培养基各组分的含量，能够实现对复发性胃癌肿瘤样本的类器官培养，提高胃癌类器官培养成功率，缩短培养周期，降低培养成本，并且为揭示复发性胃癌发病机理和筛选抗癌药物奠定了基础。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体的涉及一种复发性胃癌类器官的培养基及其培养方法。

背景技术

胃癌是消化系统最常见的一种恶性肿瘤，目前其新发病例数全球每年约100万余例，位居所有肿瘤第6位；全球每年因胃癌致死病例数约76万余例，位居所有肿瘤第3位。胃癌的治疗手段有手术治疗、化学治疗、放射治疗、免疫治疗和靶向治疗等，综合治疗后的胃癌患者5年生存率仅32％，其中局部、区域和远处转移胃癌患者的5年生存率分别为70％，32％和6％。影响胃癌患者生存和预后的最重要因素是初次治疗后的肿瘤复发，一旦胃癌复发，患者生存率直线下降。而临床上超过60％的胃癌患者在根治性手术后会复发，且复发高峰期在术后两年内。胃癌复发后的治疗相较初诊时难度增加，依据指南采用的方案，于大部分胃癌复发患者治疗效果欠佳，而方案的副作用往往使进一步更换治疗方案的可能性大大降低。如何改善复发性胃癌的治疗效果，提高胃癌患者生存率是胃癌治疗领域的重点和难点，而肿瘤个体化治疗(精准治疗)是重要的潜在方向。

目前普遍应用的肿瘤精准治疗疗效预测工具是基因测序，然而依据基因变异指导复发性胃癌治疗的价值非常有限。肿瘤类器官(tumor organoid)是由患者肿瘤组织体外培养而来的类器官。肿瘤类器官能在病理学形态、基因变异、染色体稳定性和肿瘤异质性等方面忠实模拟所对应患者体内肿瘤，因此肿瘤类器官是指导肿瘤精准治疗的绝佳工具。目前原发胃癌类器官培养体系已被成功建立，中国香港玛丽医院Helen H.N.Yan等于2018年建立了胃癌类器官生物样本库，并证明胃癌类器官可体现胃癌异质性，具有药物筛选价值，但原发胃癌培养成功率仅为50％左右。日本庆应义塾大学医学院的Toshiro Sato改良了原发胃癌培养方法，培养成功率从54％上升到74％。而复发肿瘤与原发肿瘤有较大的差异，一般原发肿瘤培养基能培养极少数复发肿瘤类器官，成功率往往在10％左右，因此复发性胃癌的肿瘤类器官的稳定高效培养是一大挑战，目前尚未见到相关研究报道，这对肿瘤类器官指导复发性胃癌精准治疗造成明显障碍。

发明内容

本专利发明成功构建了高效的复发性胃癌肿瘤类器官培养基，利用该系列培养基，复发胃癌类器官的培养成功率可高达70-80％，为肿瘤类器官用于指导复发胃癌精准治疗打下了坚实基础。

本发明的目的在于，提供一种适宜复发胃癌类器官培养的培养基，进而获得复发胃癌类器官，以便能够研究复发胃癌发病机制和病程以及筛选相关抗癌药物。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供一种复发胃癌的类器官培养基，所述培养基成分包括如下成分:

DMEM/F12培养基，抗坏血酸(1-100mg/L)，L-Glutathine(1-100mg/L)，亚硒酸钠(0.002-0.5mg/L)，乙醇胺盐酸盐(2-200mg/L)，偏钒酸铵(1×10^-4-20×10^-4mg/L)，四水合氯化锰 (5×10^-5-50×10^-5mg/L)，β-巯基乙醇(0.01-50mM)，BSA(0.1-10％)。

R-spondin 1(50-1000ng/ml)，Noggin(10-200ng/ml)，GlutaMAX Supplement(1×)，N2: B27(0.1-2)，HEPES(1×)，烟酰胺(1-100mM)，Normocin^TM(1×)，N-乙酰半胱氨酸(0.1-100mM)。

优选的，所述培养基中还包括A83-01，进一步优选的，所述A83-01浓度为0.1-50μM。

优选的，所述培养基中还包括N-亚基二乙胺，进一步优选的，所述N-亚基二乙胺浓度为 0.1-100ng/ml。