[发明专利]一种基于MBTH法测定肺炎球菌活化糖中还原糖含量的方法、试剂和试剂盒

权利要求书

1.一种基于MBTH法测定肺炎球菌活化糖中还原糖含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)建立线性回归方程

梯度标准溶液的配制：将作为标准品的甘油醛配制成的浓度为(40～320)nmol/ml的梯度标准溶液；

梯度标准溶液的预处理：先分别向所述梯度标准溶液中加入浓度为(0.05～0.15)mol/L的盐酸溶液和浓度为(0.2～0.3)wt%的MBTH水溶液密封并混匀，之后在35～40℃的温度下反应20～40min，冷却至20～30℃；再分别向所述梯度标准溶液中加入浓度为(0.7～1.0)wt%的三氯化铁水溶液密封并混匀，之后在35～40℃的温度下反应3～10min，冷却至20～30℃；其中，所述梯度标准溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:(2.925~3.575):(0.9～1.1):(0.9～1.1)；

线性回归方程的获得：以水作为空白对照，并在波长650nm处测定经过预处理后的梯度标准溶液的吸光度，以梯度标准溶液的浓度作为横坐标，以梯度标准溶液的吸光度作为纵坐标，绘制标准曲线，计算得到线性回归方程；

(2)测定还原糖含量

待测样品溶液的配制：用水将待测样品稀释，得到待测样品溶液；

待测样品溶液的预处理：先分别向所述待测样品溶液中加入浓度为(0.05～0.15)mol/L的盐酸溶液和浓度为(0.2～0.3)wt%的MBTH水溶液密封并混匀，之后在35～40℃的温度下反应20～40min，冷却至20～30℃；再分别向所述待测样品溶液中加入浓度为(0.7～1.0)wt%的三氯化铁水溶液密封并混匀，之后在35～40℃的温度下反应3～10min，冷却至20～30℃；其中，所述待测样品溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:(2.925~3.575):(0.9～1.1):(0.9～1.1)；

还原糖含量的获得：以水作为空白对照，并在波长650nm处测定经过预处理后的待测样品溶液的吸光度；根据步骤(1)所得到的线性回归方程，计算出所述待测样品溶液的吸光度在标准曲线上所对应横坐标的浓度；

待测样品中还原糖的浓度=待测样品溶液的浓度×待测样品的稀释倍数。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述梯度标准溶液的数量至少为3个。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述梯度标准溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:(3.0875~3.4125):(0.95～1.05):(0.95～1.05)；

优选的，步骤(1)中，所述梯度标准溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:3.25:1:1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所得到的线性回归方程为y=0.00532x+0.02236；

优选的，所述线性回归方程y=0.00532x+0.02236的拟合优度R²=0.99908。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述待测样品溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:(3.0875~3.4125):(0.95～1.05):(0.95～1.05)；

优选的，步骤(2)中，所述待测样品溶液、所述盐酸溶液、所述MBTH水溶液和所述三氯化铁水溶液的体积比为1:3.25:1:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和/或步骤(2)中，所述盐酸溶液的浓度为(0.08～0.12)mol/L，例如：0.09mol/L、0.10mol/L、0.11mol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)和/或步骤(2)中，所述MBTH水溶液的浓度为(0.23～0.27)wt%，例如：0.24wt%、0.25wt%、0.26wt%。