[发明专利]一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用，属于水凝胶技术领域。一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备方法，包括以下步骤：将去细胞化小肠黏膜下层消化后盐析冻干，制成粉末后溶解，并与丝素蛋白溶液混合后超声，即得。所述细胞外基质水凝胶可以作为皮肤损伤修复敷料和生物相容性细胞支架使用。结合丝素蛋白后，伤口愈合速度和皮肤愈合程度均得到明显提升。

技术领域

本发明涉及一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用，属于水凝胶技术领域。

背景技术

脱细胞化组织来源的细胞外基质水凝胶作为一种生物相容性良好的支架材料已被广泛应用于组织工程领域。经过去细胞化处理的小肠黏膜下层主要含有Ⅰ型、Ⅲ型胶原，丰富的纤维链接蛋白以及生长因子等，是保护创面、促进组织愈合的理想细胞支架材料。丝素蛋白是一种从家蚕蚕丝中提取而来的天然生物材料，具有良好的生物相容性。目前临床上，在创伤修复治疗中，皮肤损伤后移植依旧存在皮源不足，免疫排斥等问题，因此寻找一种生物相容性良好、取材方便且可以批量制备的生物材料变得十分重要。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠粘膜下层细胞外基质水凝胶及其制备方法与应用。

本发明提供了一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备方法，包括以下步骤：将去细胞化小肠黏膜下层消化后盐析冻干，制成粉末后溶解，并与丝素蛋白溶液混合后超声，即得。

进一步地，上述技术方案中，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将猪去细胞化小肠黏膜下层粉末用消化液消化，离心，取上清液，调节pH至7-7.5；加盐析出、离心若干次，保留沉淀，冷冻干燥；

(2)取干燥后的沉淀粉末，按50-100mg/ml加入0.1-0.2％(v/v)乙酸溶解，用10xDMEM调节渗透压至生理水平；

(3)3-6％(w/v)的丝素蛋白溶液超声，将步骤(2)所得溶液按体积比1:1-1:1.5加入超声后的丝素蛋白溶液；

(4)将混合后的溶液超声，接种于孔板中，孵育，即得。

进一步地，上述技术方案中，所述猪去细胞化小肠黏膜下层粉末是由猪小肠黏膜下层经脱脂，脱细胞，胃蛋白酶消化，多次盐析离心，真空冷冻干燥，粉碎研磨后制得。

进一步地，上述技术方案中，所述脱脂为猪小肠黏膜下层在甲醇和氯仿体积比为1:1-1:1.5的溶液中避光静置。

进一步地，上述技术方案中，所述脱细胞为将脱脂后的猪小肠黏膜下层浸泡于去离子水配制的0.04-0.06％(w/v)胰蛋白酶/0.04-0.06％(w/v)乙二胺四乙酸二钠的溶液中，再于0.4-0.6％(w/v)SDS和生理盐水中摇动4-5小时。

进一步地，上述技术方案中，消毒和清洗为将脱细胞后的猪小肠黏膜下层浸泡于0.1-0.2％(w/v)过氧乙酸和15-25％(v/v)乙醇中；用去离子水彻底冲洗，去除残留的试剂，更换去离子水至摇晃无泡沫。

进一步地，上述技术方案中，步骤(1)所述消化液为胃蛋白酶消化液，所述猪去细胞化小肠黏膜下层与胃蛋白消化酶的质量比为10:1，再按10mg/ml加入3％乙酸，48-72h后，猪去细胞化小肠黏膜下层无絮状物，呈半透明状，离心。

本发明还提供了根据上述的制备方法制备得到的结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶。

本发明还提供了结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶在制备皮肤损伤修复敷料中的应用。

本发明还提供了结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶在制备生物相容性细胞支架中的应用。