[发明专利]一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用

权利要求书

1.一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：将去细胞化小肠黏膜下层消化后盐析冻干，制成粉末后溶解，并与丝素蛋白溶液混合后超声，即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将猪去细胞化小肠黏膜下层粉末用消化液消化，离心，取上清液，调节pH至7-7.5；加盐析出、离心若干次，保留沉淀，冷冻干燥；

(2)取干燥后的沉淀粉末，按50-100mg/ml加入0.1-0.2％(v/v)乙酸溶解，用DMEM调节渗透压至生理水平；

(3)3-6％(w/v)的丝素蛋白溶液超声，将步骤(2)所得溶液按体积比1:1-1:1.5加入超声后的丝素蛋白溶液；

(4)将混合后的溶液超声，接种于孔板中，孵育，即得。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述猪去细胞化小肠黏膜下层粉末是由猪小肠黏膜下层经脱脂，脱细胞，胃蛋白酶消化，多次盐析离心，真空冷冻干燥，粉碎研磨后制得。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述脱脂为猪小肠黏膜下层在甲醇和氯仿体积比为1:1-1:1.5的溶液中避光静置。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述脱细胞为将脱脂后的猪小肠黏膜下层浸泡于去离子水配制的0.04-0.06％(w/v)胰蛋白酶/0.04-0.06％(w/v)乙二胺四乙酸二钠的溶液中，再于0.4-0.6％(w/v)SDS和生理盐水中摇动4-5小时。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：消毒和清洗为将脱细胞后的猪小肠黏膜下层浸泡于0.1-0.2％(w/v)过氧乙酸和15-25％(v/v)乙醇中；用去离子水彻底冲洗，去除残留的试剂，更换去离子水至摇晃无泡沫。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述消化液为胃蛋白酶消化液，所述猪去细胞化小肠黏膜下层与胃蛋白消化酶的质量比为9:1-11:1，再按9.5-10.5mg/ml加入2.5％-3.5％(v/v)乙酸，48-72h后，猪去细胞化小肠黏膜下层无絮状物，呈半透明状，离心。

8.权利要求1-7中任一项所述的制备方法制备得到的结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶。

9.权利要求8所述的结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶在制备皮肤损伤修复敷料中的应用。

10.权利要求8所述结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶在制备生物相容性细胞支架中的应用。