[发明专利]德谷胰岛素生物学活性的检测方法及检测试剂盒

权利要求书

1.德谷胰岛素生物学活性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A：取含有胰岛素受体的细胞复苏、传代、铺板、过夜培养；

步骤B：取捕获抗体经包被缓冲液稀释后铺板，封板后避光孵育过夜；

步骤C：取标准品和供试品经系列梯度稀释，分别转至清洗后的步骤A获得的细胞板，封板后孵育，再经裂解液裂解，获得细胞裂解液；

步骤D：取步骤B获得的检测板清洗后经封闭液封闭后培养、去除封闭液、清洗，转入步骤C获得的所述细胞裂解液，培养；

步骤E：清洗后，加入报告抗体孵育；去除所述报告抗体，清洗，经显色液显色，避光孵育，再加入终止液，检测，获得EC50值；

根据所述标准品EC50值、所述供试品EC50值、标准品标示比活、所述标准品的起始浓度和所述供试品的起始浓度，获得所述德谷胰岛素生物学活性。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤A中所述铺板的细胞密度包括5×10⁴个/ml～1×10⁵个/ml，以100μl/孔铺板；

作为优选，步骤A中所述铺板的细胞密度为7.5×10⁴个/ml。

3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤C中所述系列梯度稀释为倍比稀释，所述标准品或所述供试品的初始浓度包括3000～6000pmol/ml；

作为优选，所述倍比稀释的倍数为2倍；

作为优选，所述标准品或所述供试品的初始浓度为3000pmol/ml。

4.如权利要求1至3任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤C中所述孵育具体为：于37℃，5％CO₂孵育30min±10min或2h±10min；作为优选，步骤C中所述孵育的时间为30min±10min。

5.如权利要求1至4任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤E获得所述德谷胰岛素生物学活性具体为：

德谷胰岛素生物活性(nmol/mg)＝标准品EC50/供试品EC50×标准品标示比活×校正因子

其中，所述标准品标示比活为163.9nmol/mg，校正因子＝标准品起始浓度/供试品起始浓度。

6.德谷胰岛素生物学活性的检测试剂盒，其特征在于，包括：

含有胰岛素受体的细胞；

标准品；

裂解液；

经捕获抗体包被的检测载体；

封闭液；

报告抗体；

显色液；

终止液。

7.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品的起始浓度包括3000～6000pmol/ml；作为优选，所述标准品的初始浓度为3000pmol/ml；

作为优选，所述标准品的倍比稀释的倍数为2倍。

8.如权利要求6或7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述含有胰岛素受体的细胞的铺板密度包括5×10⁴个/ml～1×10⁵个/ml，以100μl/孔铺板；

作为优选，所述含有胰岛素受体的细胞的铺板密度为7.5×10⁴个/ml。