[发明专利]基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法

权利要求书

1.基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于，包括以下测定条件及步骤：

S1对照溶液的制备

精密称取土鳖虫对照药材粉末适量，用70％甲醇超声提取，制成对照溶液；

S2供试品溶液的制备

分别精密称取当归粉末、三七粉末、醋乳香粉末、冰片、煅自然铜、不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫药材粉末、金边地鳖、两批龙虱和三批活血止痛胶囊内容物适量，分别用70％甲醇超声提取，制成各供试品溶液；

S3色谱分析条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(规格：250×4.6mm)(SN：USNH085399，LN：B20441)，流动相A：乙腈，流动相B：0.1％磷酸水，检测波长：203nm，柱温30℃，流速：1.0ml/min，进样量：10ul，梯度分析方法：0-10min:20％A；10-100min:20％～90％A；100-110min；90％A；110-115min:90％A～20％；115-130min 20％A；

S4特征峰图谱确定

(1)精密吸取对照溶液10μL注入液相色谱仪，测定，记录120分钟的色谱图，即得对照物液相色谱图；

(2)精密吸取不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫制备的供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图，得到多个土鳖虫液相色谱图；

(3)对土鳖虫对照药材、不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫进行色谱检测，确定土鳖虫对照药材和不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫的共有化合物，即为土鳖虫的色谱图中特征峰图谱，作为鉴别土鳖虫标准中的特征峰图谱；

S5鉴别

(1)精密吸取除不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫外的其他供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图，得到多个供试品液相色谱图；

(2)将特征峰图谱与当归粉末、三七粉末、醋乳香粉末、冰片和煅自然铜制备的供试品溶液检测的液相色谱图进行色谱图比对；

(3)将特征峰图谱与三批活血止痛胶囊内容物相制备的供试品溶液检测的色谱图比对，寻找土鳖虫特有的特征峰，根据特征峰的有无，即可确定活血止痛胶囊的质量。

2.根据权利要求1所述的基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于：S1中，精密称取土鳖虫对照药材粉末1.11g，精密加70％甲醇50mL，超声1h，放冷，用0.22μm的有机滤膜过滤，取续滤液，即得。

3.根据权利要求1所述的基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于：S2中，精密称取当归粉末2.22g，三七粉末0.44g，醋乳香粉末0.44g，冰片0.11g，煅自然铜0.67g，不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫粉末、金边地鳖、两批龙虱各1.11g，三批活血止痛胶囊内容物各5.00g，分别置100ml磨口锥形瓶中，分别精密加70％甲醇50mL，超声1h，放冷，用0.22μm的有机滤膜过滤，取续滤液，即得。

4.根据权利要求1所述的基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于：S3中，特征峰图谱建立中，至少选取不同产地、不同类型、不同批次的土鳖虫10批进行液相色谱检测分析。

5.根据权利要求1所述的基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于：S5中，按土鳖虫特征峰图谱与活血止痛胶囊内容物色谱图中各峰比对。

6.根据权利要求5所述的基于HPLC法的活血止痛胶囊中土鳖虫的鉴别方法，其特征在于：S5中，应匹配到土鳖虫特征峰图谱中所有的特征峰。