[发明专利]一种从油橄榄果渣油脱臭馏出物中分离赤桐甾醇的方法

说明书

本发明涉及从油橄榄果渣油脱臭馏出物中分离赤桐甾醇的方法，该分离方法包括油橄榄植物甾醇制备、β‑谷甾醇分离、赤桐甾醇富集与赤桐甾醇纯化等步骤。本发明采用高速逆流色谱方法进行分离橄榄油甾醇中的赤桐甾醇，分离方法简单，赤桐甾醇纯度高，还得到了高纯度的β‑谷甾醇和δ‑5,23‑豆甾二烯醇产品。

【技术领域】

本发明属于食品技术领域。更具体地，本发明涉及一种从油橄榄果渣油脱臭馏出物中分离赤桐甾醇的方法。

【背景技术】

油橄榄(Olea europaea L.)是知名的木本油料植物，属木犀科(Oleaceae)木犀榄属。油橄榄是橄榄油的主要原料。橄榄油由约98％以上的甘油三酯和1～2％的生物活性物质组成。越来越多的研究表明，橄榄油的营养功能与橄榄油中的微量生物活性物质密切相关。橄榄油中最值得一提的生物活性物质有生育酚、甾醇、角鲨烯和多酚类物质。其中，植物甾醇是橄榄油中不皂化物的重要组成部分，以β-谷甾醇为主，此外还含有菜油甾醇、δ-5-燕麦甾醇、赤桐甾醇、δ-5-23-豆甾二烯醇等10余种其他甾醇。而其中一些甾醇具有特殊的生理活性，如赤桐甾醇，可增强细胞对胆汁酸盐的摄取，具有疏肝解郁的活性；还具有减弱UVB引起的细胞毒性，减弱环氧合酶-2、诱导型一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子等促炎症蛋白的表达，通过半胱氨酸蛋白酶家族使人黑色素瘤细胞凋亡等作用，是一种非常重要的化合物。但因甾醇同系物间结构相似，且多为同分异构体，分离困难，所以研究较少，大部分研究均集中在检测方面如刘贵银等人在题目“精制橄榄油中甾醇的分离与测定”，《食品科技》，2018，43(06)，pp193-198中建立了精制橄榄油中甾醇的高效液相色谱分离和气相色谱检测方法。方欣欣等人在题目“油脂类药用辅料橄榄油中甾醇谱的研究”，《药物分析杂志》，2015，35(11)，pp1924-1929中轴线从橄榄油中提取不皂化物，运用高效液相色谱法从不皂化物中分离并收集甾醇的馏分，然后对馏分进行衍生化采用气相色谱法检测个甾醇的组成及百分含量等。

因此，针对现有橄榄油不皂化物中赤桐甾醇分离技术研究较少，无成熟技术等，本发明人在总结现有技术基础之上，通过大量实验研究与分析总结，终于完成了本发明。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种从油橄榄果渣油脱臭馏出物中分离赤桐甾醇的方法。

[技术方案]

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种从油橄榄果渣油脱臭馏出物中分离赤桐甾醇的方法。该分离方法的步骤如下：

A、油橄榄植物甾醇制备

以油橄榄果渣油脱臭馏出物为原料，经酯化、酯交换、冷析、过滤与重结晶步骤处理，得到纯度以重量计95％以上油橄榄植物甾醇；

B、β-谷甾醇分离

把步骤A得到的植物甾醇添加到正丁醇-环己酮混合溶剂中，在温度70～80℃下搅拌30～60min，趁热过滤，将收集滤液的温度降至30～35℃，并在这个温度下保持120～150min，过滤，得到含有β-谷甾醇富集物的滤饼，它接着按照同样方式重复处理1～3次，得到β-谷甾醇产品滤饼；这种滤饼减压干燥，β-谷甾醇纯度达到以重量计95％以上；

所得到的滤液合并，减压浓缩至合并滤液体积的1/6～1/5，再将其温度降至10～15℃，并在这个温度下保持120～150min，过滤，滤饼经干燥得到植物甾醇混合物X。

C、赤桐甾醇富集

步骤B得到的植物甾醇混合物X使用固定相I与流动相I按照体积比1:1混合的混合相I溶解，得到一种植物甾醇混合物X溶液，使用高速逆流色谱仪分离纯化，其流出液采用UV检测器在波长210nm处检测，收集同一峰的流出液，脱除溶剂，分别得到植物甾醇混合物X₁、植物甾醇混合物X₂和植物甾醇混合物X₃。