[发明专利]一种用于棉花枯萎病防治的贝莱斯芽孢杆菌菌剂的发酵制备及应用

权利要求书

1.一种防治棉花枯萎病的生防菌株，其特征在于，所述生防菌株命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)RJW-5-5，；保藏登记号为CGMCC No.22939；保藏时间为2021年07月22日；保藏机构为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。

2.一种微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂中含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5。

3.根据权利要求2所述的微生物菌剂，其特征在于，所述微生物菌剂是可湿性粉剂，所述可湿性粉剂中所述贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5的活菌数为5x10⁹ CFU/g-5x10¹⁰ CFU/g。

4.一种权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤，

(1)将贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5菌株接种到LB固体培养基上进行活化；

(2)将活化后的贝莱斯芽孢杆菌接种到LB液体培养基中得到培养液，并放到恒温摇床上振荡，温度35-37℃、转速150-220r/min振荡15-20小时，即制得种子液；

(3)制备固体发酵培养物：将步骤(2)获得的种子液以1:8-12(体积/质量)的比例混合固体发酵培养基，进行固体发酵培养；发酵培养条件为：培养温度35-37℃、培养时间55-75h、初始pH值6.0，即制得固体发酵培养物；

(4)可湿性粉剂制备：将步骤(3)获得的固体发酵培养物与任选的载体、润湿剂、分散剂、稳定剂、保护剂混合，随后烘干制成可湿性粉剂。

5.根据权利要求4所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：

步骤(1)中所述LB固体培养基配方为：酵母浸膏5g，蛋白胨12g，NaCl 5g，琼脂18g，水1000ml，pH 7.5；

步骤(2)中所述LB液体培养基配方为：酵母浸膏5g，蛋白胨12g，NaCl 5g，水1000ml，pH7.5；

步骤(3)中所述固体培养基配方为：100g豆饼粉，320g玉米粉，100g淀粉酶，50gNa₂HPO₄，10g NaCl，75g蔗糖，1g MgSO₄，0.5g MnSO₄。

6.根据权利要求4所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，

步骤(2)中，所述温度优选36℃、转速优选200r/min振荡18小时；

步骤(3)中，发酵培养条件为：培养温度36℃、培养时间65h、初始pH值6.0。

7.根据权利要求4所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：

步骤(4)可湿性粉剂制备的具体步骤为：在步骤(3)获得的固体发酵培养物中加入其重量的5-8％的硅藻土，制成母粉；然后加入润湿剂聚乙二醇、分散剂木质素磺酸钠、稳定剂CMC-Na、保护剂糊精以及余量的硅藻土，烘干制成可湿性粉剂；

所述可湿性粉剂中各原料成分的重量百分含量为：固体发酵培养物30-50％、润湿剂5-8％、分散剂3-6％、稳定剂1-3％、保护剂2-5％，硅藻土余量。

8.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5作为棉花枯萎病病害拮抗菌的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌RJW-5-5制成可湿性粉剂，应用方式为叶面喷雾，喷雾最佳时间为棉花叶片出现零星病斑时开始进行第一次喷雾处理，用水稀释500倍，用量100g/667m²。