[发明专利]一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法及应用，该方法通过杂交瘤技术采用Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株Anti‑XJEmSfAg‑4D6。由该细胞株通过体外培养法、动物体内诱生腹水法获得特异性单克隆抗体，制备了多房棘球绦虫成虫免疫组化试剂盒。本发明为临床和科研机构提供了抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原的特异性单克隆抗体，它既可用于ELISA实验对临床样品进行检测，也可用于免疫组化实验对病理标本进行检测，还可为包虫病研究部门提供便利的研究工具，在终末宿主感染多房棘球绦虫的检测中有广泛的应用价值，为泡型包虫病的基线调查和防控效果评估提供了技术支撑。

技术领域

本发明属于生物及细胞工程技术领域，涉及一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法及其应用。

背景技术

泡型棘球蚴病(AE，Alveolar Echinococcosis)，是由多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，Em)的幼虫阶段引起的人类最致命的蠕虫病之一，主要以野生动物自然循环为主，流行于北半球，呈局部地方性流行，在我国主要流行于西藏、四川西部、甘肃、青海南部高原、新疆北部和内蒙古东部呼伦贝尔草原等西部牧区和半农牧区。由于我国西部牧区野生狐狸、放牧犬和啮齿类动物分布广泛，使得多房棘球绦虫生活史存在复杂性，增加了宿主动物和人传播和感染该病的风险，可造成严重的社会经济问题。

终末宿主感染多房棘球绦虫的诊断和检测技术有氢溴酸槟榔碱下泻法，剖检法等，这些方法可能感染操作者，并且污染环境，造成包虫病的传播，引起严重的公共卫生安全。

单克隆抗体技术是20世纪70、80年代兴起的分子生物学技术，是针对某一特定的抗原表位由单个B淋巴细胞产生的特异性抗体。随着细胞生物学和分子生物学技术的不断发展，单克隆抗体作为生命科学技术相关研究的重要技术之一，越来越被广泛普及，在食品、农业、生物科技以及医学等各个领域都得到较为广泛的应用，特别是免疫学方面的应用，单克隆抗体可用于疾病的诊断和预防。单克隆抗体可准确识别病原体的类型，且能针对感染性疾病做出精确的判断。病原刺激机体后，机体可对侵入的病原体做出特异性抵抗，包括主动免疫和被动免疫。这两种方式均可使用单克隆抗体。本发明所公布的杂交瘤细胞株Anti-XJEmSfAg-4D6单克隆抗体，可以作为终末宿主多房棘球绦虫抗原ELISA检测的诊断试剂，为多房棘球绦虫的诊断以及大范围普查检测试剂盒的制备提供必要条件。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法及其应用。

本发明的目的是提供能分泌抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供由杂交瘤细胞株分泌的抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原的特异性单克隆抗体。

本发明的又一目的是制备的单克隆抗体用于终末宿主感染多房棘球绦虫成虫的检测。

本发明所述的一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法，按下列步骤进行：

建立细胞株：

a、抗原制备：

将感染多房棘球蚴包囊的老鼠安乐死，75％酒精消毒3min，移入生物安全柜中，将其腹部朝上，固定于解剖板上，用无菌剪刀和镊子剪开腹部皮肤和腹膜，打开腹腔，将包囊取出，用剪刀剔除周围的结缔组织，剪碎包囊，用双层无菌医用纱布筛进行过滤，收集原头蚴，计数，取15-20万枚原头蚴经口服人工感染犬，25天后剖检犬，收集多房棘球绦虫成虫，取1mL成虫装入5mL离心管中，加入等体积的1％曲拉通X-100，室温轻轻摇晃7-10次，3500rpm/min，温度4℃离心10min，收集上清，即为提取的多房棘球绦虫成虫表膜抗原EmSfAg；