[发明专利]一种利用黄曲霉菌核保藏黄曲霉菌种的方法

说明书

本发明公开了一种利用黄曲霉菌核保藏黄曲霉菌种的方法，主要包括：S1：刺激黄曲霉菌核产生；S2：黄曲霉菌核收集、洗涤、烘干；S3：黄曲霉菌核保藏；由于黄曲霉菌核具有较强的抗逆性，遗传背景稳定，适宜长时间保存而不易变异；通过对黄曲霉的菌核进行保藏，有效的解决了菌株易变异，保存和接种过程易造成环境污染的难题，使黄曲霉的保藏方法简便有效，菌株遗传稳定。

技术领域

本发明属于黄曲霉保存技术领域，具体涉及一种利用黄曲霉菌核保藏黄曲霉菌种的方法。

背景技术

黄曲霉，半知菌类，是一种常见的腐生真菌；多见于发霉的粮食、粮制品及其它霉腐的有机物上；黄曲霉菌落生长繁殖快，结构疏松，表面灰绿色，背面无色或略呈褐色；黄曲霉的保存方法主要有：1)沙土保存法：即将沙和土以3:2比例混合，经稀酸处理洗净过筛,装入小试管内,装置高度为1cm；灭菌2～3次，烘干后即可将在斜面培养基上生长良好的孢子，用无菌蒸馏水2～2.5ml制成孢子悬液，吸取少许加入沙土管中，经真空抽干，外观呈松散状态,于4℃冰箱保存，保存期可达5～7年；2)冷冻干燥法,将孢子悬浮液与保护剂(一般用脱脂牛奶或血清)相混合，放在安瓿管内于-20～-30℃的乙醇浴中速冻；然后，在低温下用真空泵抽干，并用五氧化二磷或干冰使水汽结冻，熔封安瓿管，于低温下保存；保存期可达5～10年之久；3)石蜡油封存法，在斜面菌种培养物上,倒上灭菌后的石蜡油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低温干燥处保存，此法不适用于能利用石蜡油作碳源的微生物，保存期为一年以上；4)滤纸片保藏法；

由于黄曲霉产孢量大，保存过程中和保存后的接种很容易导致黄曲霉孢子扩散而污染环境；黄曲霉产生的菌核具有较强的抗逆性，遗传稳定，适宜长时间保存而不易变异。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种利用黄曲霉菌核保藏黄曲霉菌种的方法，通过刺激黄曲霉产生菌核，对菌核进行处理后，单独对黄曲霉的菌核进行保藏，后期对菌核进行培养繁殖产生黄曲霉；

为了达到上述技术目的，本发明是通过以下技术方案实现的：一种利用黄曲霉菌核保藏黄曲霉菌种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：刺激黄曲霉菌核产生：将分离出的黄霉菌接种PSA培养基上在30～32℃环境下培养12～15d，诱导刺激黄曲霉产生菌核；

S2：收集S1中产生的黄曲霉菌核，用无菌水洗涤菌核，至表面无大量孢子附着；用滤纸吸干菌核表面水分，转入36℃-38℃恒温烘箱中烘干36-40小时；

S3：将S2中经过洗涤和烘干的黄曲霉菌核放入保存介质中封存，超低温条件下保藏；

优选的，所述保存介质为牛皮纸或甘油；

优选的，所述超低温为零下80℃。

本发明的有益效果是：

本发明通过诱导刺激黄曲霉产生菌核，对菌核进行洗涤、烘干处理后放入甘油或用牛皮纸密封，置于超低温环境下保藏；有效的解决了菌株易变异，保存和接种过程易造成环境污染的难题，使黄曲霉的保藏方法简便有效，菌株遗传稳定。

附图说明

图1是本发明的黄曲霉在PSA培养基上生长和产生的菌核；

图2是本发明的黄曲霉菌核的显微视图；

图3是本发明的黄曲霉菌核保藏于甘油中放置于-80℃超低温冰箱内保藏；

图4是本发明黄曲霉菌核接代培养。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1