[发明专利]腺相关病毒的纯化方法和洗脱液

权利要求书

1.一种纯化腺相关病毒(AAV)的方法，其中，所述方法包括：

(a)将含有AAV的溶液加样到亲和层析柱上；

(b)用包含精氨酸和镁离子的第一洗脱液从亲和层析柱上洗脱AAV，收集含AAV的洗脱液；

(c)对步骤(b)获得的含AAV的洗脱液进行超速离心。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述精氨酸的浓度为200mM至2000mM，优选400mM至1000mM，更优选500mM至800mM；和/或所述镁离子的浓度为0.5mM至3mM，优选1mM至3mM，更优选1.5mM至2.5mM。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述第一洗脱液包含：0.1-2M AcOH、200-2000mM精氨酸、137-600mM NaCl或Na₂SO₄、0.5-3mM MgCl₂或MgSO₄，以及0.05％泊洛沙姆188；优选地，所述第一洗脱液的pH为2.5～3.2。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，步骤(b)中还使用包含尿素和镁离子的第二洗脱液进行AAV的洗脱。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述第二洗脱液包含2-6M尿素和0.5-3mM MgCl₂。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述超速离心为碘克沙醇密度梯度超速离心或氯化铯密度梯度超速离心。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述AAV为AAVz2。

8.由权利要求1至6中任一项所述的方法获得的AAV。

9.根据权利要求8所述的AAV，其中，所述AAV是AAVz2。

10.权利要求8或9所述的AAV在制备用于治疗疾病的药物中的应用，其中，所述疾病为肝脏疾病或需要递送基因至肝脏中表达的其他疾病。

11.根据权利要求10所述的应用，其中，肝脏疾病包括：原发或继发性肝癌、肝硬化、肝脓肿、脂肪肝、酒精性肝病、肝移植、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、自身免疫性肝炎、药物毒性肝炎以及其他肝炎。

12.根据权利要求10或11所述的应用，其中，需要递送基因至肝脏中表达的其他疾病包括：A型和B型血友病、溶酶体贮积症(例如MPS II和III)、法布里综合征、糖原贮积症、贝墩氏症、高歇氏病、沃尔曼氏症、威尔逊氏症、自身免疫性疾病(例如多发性硬化症、重症肌无力、风湿或类风湿性关节炎、红斑狼疮、自身免疫性心脏病)、心血管疾病或肺部疾病(例如高血压、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、慢性阻塞性肺疾病)、高血氨症、糖尿病、沙费利波综合征、综合性创伤、肾衰竭、贫血。

13.亲和柱洗脱液，其包含：精氨酸和镁离子；优选200-2000mM精氨酸和0.5-3mM镁离子。

14.根据权利要求13所述的亲和柱洗脱液，其中，所述亲和柱洗脱液包含：0.1-2MAcOH、200-2000mM精氨酸、137-600mM NaCl或Na₂SO₄、0.5-3mM MgCl₂或MgSO₄，以及0.05％泊洛沙姆188；优选地，所述亲和柱洗脱液的pH为2.5～3.2。