[发明专利]角膜新生血管动物模型及其构建方法

说明书

本发明提供了一种角膜新生血管动物模型及其构建方法，该动物模型包括在小鼠的角膜中央切口，并在角膜缘的正前方做潜行隧道，将含血管内皮生长因子的滤纸植入隧道顶端，构建得到角膜新生血管动物模型；在小鼠的角膜中央切口之前，用戊巴比妥钠溶液注射小鼠的腹腔，爱尔凯因滴眼液麻醉小鼠的双眼表面；本发明的滤纸较薄、制作时间短，易于手术过程中植入，造模成功率高，从而增加了造模的可重复性，大大降低了成本的投入；本发明使用滤纸结合血管生长因子植入小鼠角膜层间，诱导小鼠角膜新生血管模型，可用于小鼠角膜，具有造模时间短、成本低、创伤小、且可重复性高的特点，为研究角膜新生血管抑制剂提供稳定、可靠的模型体系。

技术领域

本发明属于动物模型技术领域，具体涉及一种角膜新生血管动物模型及其构建方法。

背景技术

角膜新生血管动物模型是研究角膜新生血管的调控机制、探索和评价其防治方法的重要手段。通过物理、化学、生物、手术等各种不同的手段造模，人为地诱发角膜新生血管增生，产生类似于人类疾病的模型。目前诱导角膜新生血管模型的主要方法有：(1)角膜囊袋法：角膜囊袋法通过在角膜层间制造一个囊袋，并将诱导剂放入囊袋内，通过不断释放诱导剂从而诱生角膜新生血管的一种动物模型，该模型创伤小，成模后易于定量分析的优点^[1-3]。(2)化学方法：采用碱性化学药品氢氧化钠、硝酸银、硝酸钾等，化学试剂在角膜内的作用持续时间较长，且可能会与抑制剂共同作用于角膜新生血管，干扰实验结果。(3)物理方法：包括热烙术和角膜缝线术，这类造模方法难度大、创伤大、效率低，对角膜造成一定程度的损失，干扰试验结果。(4)免疫原性CNV动物模型：主要采用异种角膜移植或角膜基质内注射牛白蛋白，用于探索免疫原性CNV的调控机制、评价CNV和移植排斥反应的治疗方法。角膜移植创伤大，且术后恢复时间长，影响和干扰实验观察。

角膜囊袋法，常采用诱导剂在角膜基质层间植入，既往有使用明胶海棉蘸取500ng碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后，再用2％的琼脂糖包裹，将干燥后的小丸植入家兔角膜基质层，制作角膜新生血管模型，该方法一方面制备的明胶海绵-bFGF-琼脂糖缓释药丸较大，不适用于小鼠角膜囊袋植入，且制备缓释药丸需要4-5天，时间较长，增加了科研周期。另一方面明胶海绵长期以来一直应用于外科临床，用来止血和促进伤口愈合，其对角膜新生血管还是存在一些自身的刺激因素，干扰了实验结果。因此存在造模时间长、成本高、造模难度大的缺点，容易造模失败，增加了科研经费的投入。

发明内容

针对现有技术中的不足，本发明的首要目的是提供一种角膜新生血管动物模型。该模型是在角膜囊袋术的思路基础上，结合滤纸植入，既避免了角膜缝线模型的造模难度大、创伤大、效率低等问题，也可简单、有效、可控，通过在角膜层间植入经促血管生长因子浸润后的大小一致的滤纸诱导角膜新生血管，造模时间短、成本低、创伤小，且可重复性高为研究角膜新生血管抑制剂提供稳定、可靠的模型体系。

本发明的次要目的是提供上述角膜新生血管动物模型的构建方法。

为达到上述首要目的，本发明的解决方案是：

一种角膜新生血管动物模型，其包括在小鼠的角膜中央切口，并在角膜缘的正前方做潜行隧道，将含血管内皮生长因子的滤纸植入隧道顶端，构建得到角膜新生血管动物模型。

作为本发明的优选实施例，在小鼠的角膜中央切口之前，用戊巴比妥钠溶液注射小鼠的腹腔，爱尔凯因滴眼液麻醉小鼠的双眼表面。

作为本发明的优选实施例，滤纸的厚度为0.3-0.6mm，优选为0.5mm。

作为本发明的优选实施例，潜行隧道的过程：用巩膜隧道刀向角膜缘的正前方做潜行隧道，隧道顶端距离角膜缘1-3mm。

作为本发明的优选实施例，隧道的长度为1.5-2mm，宽度为1-1.5m。

为达到上述次要目的，本发明的解决方案是：

一种如上述的角膜新生血管动物模型的构建方法，其包括如下步骤：