[发明专利]分泌ActA单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了分泌ActA单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株于2021年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:C2021174。本发明还公开了该杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌得到ActA单克隆抗体，含有该ActA单克隆抗体的检测试剂盒和免疫磁珠、免疫磁珠的制备方法和应用及竞争ELISA和间接ELISA检测方法。本发明ActA单克隆抗体具有效价高、特异性好、与天然抗原亲和力较强的优势。基于此抗体研制的李斯特菌竞争ELISA检测试剂盒及免疫磁珠灵敏度高、稳定性良好，能有效监测临床血清样品中ActA抗体的水平，可用于标记单核细胞增生李斯特菌。

技术领域

本发明涉及分泌ActA单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物检测技术领域。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)是一种重要的食源性人兽共患致病菌，具有广泛的宿主谱，能引起人和动物的李斯特菌病。该菌感染动物后给养殖场造成严重的经济损失，动物携带的Lm经屠宰加工环节进入食物链，沿着动物产品加工、运输、销售环节到了餐桌，引起人类的感染，死亡率高达30％，严重危害了人类健康。

加强对动物养殖环节李斯特菌病的筛查，能够在感染初始阶段发现并采取相应的防控措施，从而阻止患病家畜进入食品产业链，对公众卫生安全具有重要意义。病原菌分离培养的方法耗时长，不能满足快速检测的需求，且只在动物发病的特定阶段检测出。目前，血清学方法是检测李斯特菌病的重要依据之一，该方法能够利用已知的细菌或者细菌抗原，对体液中有无相应的抗体进行检测，从而实现对传染性疾病的诊断。此外，ActA是Lm重要的毒力因子，位于细胞壁表面且被证实具有较强的免疫原性。选用Lm表面蛋白ActA作为检测抗原，建立竞争ELISA检测方法，实现对李斯特菌病的有效防控意义重大。

传统的细菌分离培养是检测单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)的金标准，但该技术耗时长，不能满足快速检测需求。基于核酸的病原学检测方法耗时较短，灵敏度较高，但容易受到样品种类、模板和引物等多种因素影响，对仪器设备有较高要求。而基于抗原和抗体的免疫学检测方法较好地弥补了传统检测方法和分子生物学方法的不足，在食源性疾病的检测和控制中应用广泛。其中免疫磁珠分离技术(Immunomagneticbeads technology，IMBS)以其高特异性及固相化试剂较好的稳定性等优势而被广泛研究。此外，单克隆抗体(ActA)是Lm重要的毒力因子，位于细胞壁表面且被证实具有较强的免疫原性。因此如何快速特异地检出食品中的Lm显得尤为重要。

发明内容

发明目的：本发明的所要解决的技术问题是提供了一株杂交瘤细胞株。

本发明还要解决的技术问题是提供了由杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌得到的ActA单克隆抗体。

本发明的还要解决的技术问题是提供了含有ActA单克隆抗体编码的多核苷酸。

本发明的还要解决的技术问题是提供了所述的ActA单克隆抗体、所述的多核苷酸在制备检测单核细胞增生李斯特菌试剂或试剂盒中的应用。

本发明的还要解决的技术问题是提供了检测单核细胞增生李斯特菌的竞争ELISA检测试剂盒。

本发明还要解决的技术问题是提供了用于检测单核细胞增生李斯特菌的免疫磁珠及其制备方法和应用。

本发明最后要解决的技术问题是提供了含有该免疫磁珠或免疫磁珠制成的试剂盒。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌单核细胞增生李斯特菌抗体的杂交瘤细胞株3G11，于2021年7月8日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:C2021174，保藏地址为中国武汉大学，分类命名为：杂交瘤细胞株3G11。