[发明专利]靶向SARS-CoV-2的纳米抗体及制备方法和应用

权利要求书

1. 一种靶向SARS-CoV-2的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括纳米抗体NbF2、纳米抗体NbG4、纳米抗体NbG1、纳米抗体NbD2、纳米抗体NbE8中的至少一种，其中，所述纳米抗体NbF2的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示，所述纳米抗体NbG4的氨基酸序列如Seq.IDNO.2所示，所述纳米抗体NbG1的氨基酸序列如Seq.ID NO.3所示，所述纳米抗体NbD2的氨基酸序列如Seq.ID NO.4所示，所述纳米抗体NbE8的氨基酸序列如Seq.ID NO.5所示。

2.根据权利要求1所述的靶向SARS-CoV-2的纳米抗体，其特征在于，所述的纳米抗体包括4个框架区FR1、FR2、FR3、FR4和3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3；

所述纳米抗体NbF2中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.7所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；

所述纳米抗体NbG4中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.7所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述纳米抗体NbG1中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.7所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述纳米抗体NbD2中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.7所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；

所述纳米抗体NbE8中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，FR2的氨基酸序列如SEQID NO.16所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。

3. 根据权利要求1所述的靶向SARS-CoV-2的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体NbF2的碱基序列如Seq.ID NO.17所示，所述纳米抗体NbG4的碱基序列如Seq.ID NO.18所示，所述纳米抗体NbG1的碱基序列如Seq.ID NO.19所示，所述纳米抗体NbD2的碱基序列如Seq.ID NO.20所示，所述纳米抗体NbE8的碱基序列如Seq.ID NO.21所示。

4.一种权利要求1~3任一所述的靶向SARS-CoV-2的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

提供目的蛋白，将所述目的蛋白包被在免疫管上进行富集筛选，得到噬菌体文库；

在所述噬菌体文库中选取克隆子进行验证，得到阳性克隆子；

将所述阳性克隆子进行测序并根据测序结果合成纳米抗体的基因序列；

将所述纳米抗体的基因序列克隆至表达载体中得到重组质粒，将所述重组质粒转入宿主细胞中诱导表达并进行纯化，得到靶向SARS-CoV-2的纳米抗体。

5. 根据权利要求4所述的靶向SARS-CoV-2的纳米抗体的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白的浓度为10~12 μg/mL。