[发明专利]一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法

说明书

本发明公开一种烷基化类基因毒杂质的非靶向筛查方法，包括：（1）将胺类衍生试剂与未知酰基化基因毒杂质发生酰基化反应，生成携带所述胺类衍生试剂的产物。（2）从应体系中分离出所述产物，然后利用超高效液相色谱‑三重四极杆质谱联用法对样品进行分析，利用特征离子碎片进行母离子扫描对未知酰基化基因毒杂质进行筛查，即得。本发明以胺类衍生试剂作为标记物与酰基化基因毒杂质反应可以生成携带衍生产物的产物，由于还具有以胺类衍生试剂作为标记物与不同种类的未知酰基化基因毒杂质发生反应后都可以产生共有离子碎片的特点，可方便快速地上实现对未知酰基化基因毒杂质的筛查。

技术领域

本发明涉及基因毒杂质检测技术领域，尤其涉及一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法。

背景技术

本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

酰基化试剂是药品合成中常用的试剂，在药品中可能存在微量的残留；在药品的生产、储存过程中也可能产生酰基化的杂质。酰基化试剂可以与DNA、蛋白中的氨基等富电子基团发生反应生成酰胺类物质，从而引起基因突变，致癌。酰基化试剂是常见的基因毒杂质，ICH、FDA等药品质量控制指导原则对基因毒的控制提出了严格的要求，药品中的基因毒杂质的安全阈值为1.5μg/天，但是仅适用于可预知的杂质，对未知杂质还没有有效的评估方法。

发明内容

针对上述的问题，本发明提出一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，该方法利用胺类化合物与酰基化基因毒杂质反应的特性，实现了对未知酰基化基因毒杂质的筛查。为实现上述目的，本发明的技术方案如下所示：

第一方面，本发明公开胺类衍生试剂作为标记物在未知酰基化基因毒杂质检测中的应用。

进一步地，所述胺类衍生试剂包括3-氨基-N-(4-甲氧基苯基)丙酰胺等。

进一步地，所述未知酰基化基因毒杂质为能够与胺类衍生试剂发生酰基化反应的杂质；可选地，所述未知酰基化基因毒杂质包括：特戊酰氯、噻吩乙酰氯、头孢克肟活性酯(甲酯)等中的至少一种。

第二方面，本发明公开一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，包括步骤：

(1)将胺类衍生试剂与未知酰基化基因毒杂质发生酰基化反应，生成携带所述胺类衍生试剂的产物。

(2)从应体系中分离出所述产物，然后利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法对样品进行分析，利用特征离子碎片进行母离子扫描对未知酰基化基因毒杂质进行筛查，即得。

在进一步的方案中，步骤(1)中，将所述未知酰基化基因毒杂质溶解在溶剂中后再加入所述胺类衍生试剂进行反应。

优选地，所述溶剂包括乙腈、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺等中的任意一种。

在进一步的方案中，步骤(1)中，所述胺类衍生试剂包括3-氨基-N- (4-甲氧基苯基)丙酰胺等。

在进一步的方案中，步骤(1)中，所述未知酰基化基因毒杂质为能够与胺类衍生试剂发生酰基化反应的杂质；可选地，所述未知酰基化基因毒杂质包括：特戊酰氯、噻吩乙酰氯、头孢克肟活性酯(甲酯)等中的至少一种。

进一步地，步骤(1)中，所述反应温度为40～80℃，反应时间为1小时。优选为在60℃反应1小时。