[发明专利]一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法

权利要求书

1.胺类衍生试剂作为标记物在未知酰基化基因毒杂质检测中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胺类衍生试剂包括3-氨基-N-（4-甲氧基苯基）丙酰胺、对甲氧基苯胺中的任意一种。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述未知酰基化基因毒杂质为能够与胺类衍生试剂发生酰基化反应的杂质。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述未知酰基化基因毒杂质包括：特戊酰氯、噻吩乙酰氯、头孢克肟活性酯(甲酯)中的至少一种。

5.一种衍生化-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，包括：

（1）将胺类衍生试剂与未知酰基化基因毒杂质发生酰基化反应，生成携带所述胺类衍生试剂的产物；

（2）从应体系中分离出所述产物，然后利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法对样品进行分析，利用特征离子碎片进行母离子扫描对未知酰基化基因毒杂质进行筛查，即得。

6.根据权利要求5所述的筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，步骤（1）中，将所述未知酰基化基因毒杂质溶解在溶剂中后再加入所述胺类衍生试剂进行反应；优选地，所述溶剂包括乙腈、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中的任意一种；

或者，步骤（1）中，所述胺类衍生试剂包括3-氨基-N-（4-甲氧基苯基）丙酰胺、对甲氧基苯胺中的任意一种。

7.根据权利要求5所述的筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述未知酰基化基因毒杂质为能够与胺类衍生试剂发生酰基化反应的杂质；优选地，所述未知酰基化基因毒杂质包括：特戊酰氯、噻吩乙酰氯、头孢克肟活性酯(甲酯)中的至少一种。

8.根据权利要求5所述的筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述反应温度为40~80℃，反应时间为1小时；优选为在60℃反应1小时。

9.根据权利要求5-8任一项所述的筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，步骤（2）中，通过超高效液相色谱技术分离出所述反应体系中的衍生产物；优选地，该超高效液相色谱技术的色谱柱为Thermo Hypersil Gold C18（2.1x100mm，3μm）；柱温为40℃；流动相A为0.1%乙酸水溶液；流动相B为0.1%的乙酸乙腈溶液；梯度洗脱：0-3min，2%B，3-50mi，2%→90%B，50-55min，98%B， 55.1-60min，2%B；流速为0.3mL/小时；进样量为1µL。

10.根据权利要求5-8任一项所述的筛查未知酰基化基因毒杂质的方法，其特征在于，步骤（2）中，利用三重四极杆质谱联用法使携带所述胺类衍生试剂的产物碎裂产生离子碎片，当得到的离子碎片中存在m/z279.17和/或m/z319.11的色谱峰时，判定存在未知酰基化基因毒杂质；

优选地，所述三重四极杆质谱联用法的质谱条件为：ESI正离子检测模式，进行母离子扫描检测；

优选地，所述母离子扫描检测条件为：子离子为m/z178.08，母离子扫描范围为m/z190-m/z600。