[发明专利]一种镍基类氧化酶的制备与半胱氨酸检测应用

权利要求书

1.一种镍基类氧化酶的制备，其特征在于，包括以下步骤：

1)选择制备NiO纳米棒；

2)首先将六水合氯化镍和草酸钠溶解于混合溶液中，在常温下磁力搅拌；

3)将步骤2中混合均匀的溶液，转移至100ml的反应釜中，进行充分反应；

4)然后将步骤3中的混合液进行固液分离，在10000rpm下离心5min，收集浅蓝色固体；

5)然后将浅蓝色固体放置在60℃的鼓风干燥箱干燥12h；

6)最后将干燥的浅蓝色固体在研钵里研磨成浅蓝色粉末；

7)再将浅蓝色粉末放置于瓷方舟内并放入马弗炉，控制马弗炉内1℃/min升温，在400℃下保温煅烧2h后降至室温，得到黑色固体粉末，标记为NiO-R；

8)然后称取特定量的NiO粉末并将其分散于10mM的PBS溶液中，得到NiO浓度为1mg/ml的PBS缓冲液；

9)以10mM的PBS溶液为溶剂，配制20μM的AR溶液作为酶底物，将NiO溶液和AR溶液作为对照实验，判断NiO纳米棒的类氧化酶模拟活性。

2.根据权利要求1所述的一种镍基类氧化酶的制备，其特征在于，所述六水合氯化镍的质量为0.5mmol，草酸钠的质量为1mmol，磁力搅拌时间控制在4h。

3.根据权利要求1所述的一种镍基类氧化酶的制备，其特征在于，所述混合溶液由30ml的超纯水和20ml的乙二醇混合制成。

4.根据权利要求1所述的一种镍基类氧化酶的制备，其特征在于，所述步骤3中的反应釜中温度控制在180℃，反应时间保证12h。

5.根据权利要求1所述的一种镍基类氧化酶的制备，其特征在于，所述将步骤4中得到的浅蓝色固体用超纯水和乙醇各自清洗、离心三次。

6.根据权利要求1所述的一种镍基类氧化酶的半胱氨酸检测应用，其特征在于，包括以下步骤：

1)含有不同浓度半胱氨酸溶液的配置：首先称取特定量的半胱氨酸粉末并将其溶于10mM的PBS溶液中，得到浓度为5mM的半胱氨酸溶液；

2)将步骤1中的溶液设定为母液，再用10mM的PBS缓冲溶液作为溶剂来配置不同浓度梯度的半胱氨酸溶液，最终得到含有不同浓度半胱氨酸的PBS溶液(5mM，2mM，1mM，800μM，600μM，400μM，200μM，150μM，100μM，80μM，25μM，5μM，2μM，0)；

3)不同浓度半胱氨酸的荧光测试：配置含有不同半胱氨酸浓度的AR+NiO+Cys溶液，设置相同的参数，激发波长为540nm，狭缝宽度为5，电压为600V，通过荧光光谱仪测试NiO纳米棒/AR体系的荧光强度。

4)建立线性关系：以加入的半胱氨酸浓度c为横坐标，荧光强度I与最初荧光强度I₀的差值ΔI为纵坐标建立标准线性回归曲线。

7.根据权利要求6所述的一种镍基类氧化酶的半胱氨酸检测应用其特征在于，所述步骤3中的含有不同半胱氨酸浓度的AR+NiO+Cys溶液的最终体积为1mL。

8.根据权利要求6所述的一种镍基类氧化酶的半胱氨酸检测应用其特征在于，所述步骤4中的线性回归方程为：lgΔF＝0.39356lg(C_Cys)+2.81299(相关系数R²＝0.98725)，检测范围在0.2-15μM，半胱氨酸的最低检测限可达0.2μM。