[发明专利]一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法在审
| 申请号： | 202210315633.6 | 申请日： | 2022-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN114561350A | 公开（公告）日： | 2022-05-31 |
| 发明（设计）人： | 占震锋;李庆静 | 申请（专利权）人： | 上海南滨江细胞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201109 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 牙髓 提取 干细胞 培养 方法 | ||
1.一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，包括牙髓组织，其特征在于：取牙髓组织，剪碎后加入I型胶原酶，37℃，200rpm消化10-20min，无血清培养基终止消化，吹打离散细胞团块获得单个离散的细胞，得到牙髓干细胞；并将牙髓干细胞放置在培养皿中备用；然后制备温和培养液和牙髓干细胞原代培养液。
2.根据权利要求1所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：温和培养液由DMEM/F12无血清培养液、血清替代物、bFGF和BMP-2组成。
3.根据权利要求2所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：温和培养液中的bFGF和BMP-2的质量比为(8～12)：(8～12)。
4.根据权利要求1所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：牙髓干细胞原代培养液由α-MEM培养基、体积分数为20％的胎牛血清、摩尔浓度为2mM/L的L-谷氨酰胺、0.25mg/ml的两性霉素B、0.1mM/L的L-抗坏血酸-2磷酸钠、100IU/ml青霉素，100IU/ml链霉素组成。
5.根据权利要求1所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：牙髓干细胞传代培养液为无血清培养基。
6.根据权利要求1所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：将牙髓干细胞以温和培养液为初次培养液进行基质传代培养。
7.根据权利要求6所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：将权6中培养后的牙髓干细胞放置在牙髓干细胞原代培养液进行二次培养。
8.根据权利要求1所述的一种自体牙髓提取牙髓干细胞的培养方法，其特征在于：牙髓干细胞培养密度为2×103/c㎡-5×103/c㎡。
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