[发明专利]一种聚合物修饰抗体类药物的修饰度的测定方法

权利要求书

1.一种聚合物修饰抗体的修饰度的测定方法，其包括如下步骤：将聚合物修饰抗体样品和抗体样品分别通过MALDI-TOF检测，根据质量数差异得到整体修饰度；将抗体样品经还原剂处理后通过LC-Q-TOF检测，对总离子流进行解卷积，得到抗体的轻链和重链的分子量；将聚合物修饰抗体样品经还原剂处理后通过LC-Q-TOF检测，对总离子流进行解卷积，得到聚合物修饰抗体的轻链和重链上的修饰度；将聚合物修饰抗体样品和抗体样品经还原剂处理后的轻链和重链分别通过MALDI-TOF检测，得到轻链和重链上的修饰度；将MALDI-TOF检测结果与LC-Q-TOF检测进行相互验证；

所述聚合物为聚乙二醇，所述抗体为EGFR单抗；

所述还原剂选自：β-巯基乙醇、三(2-羧乙基)磷、二硫苏糖醇中一种或多种的组合。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原剂为二硫苏糖醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理的温度为35-40℃；和/或，

所述处理的时间为10-30分钟。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理的温度为37℃。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MALDI-TOF的基质为3,5-二甲氧基-4-羟基肉桂酸；和/或，所述MALDI-TOF的Power为150。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC-Q-TOF为UPLC-Q-TOF，所述LC的固定相为UPLC BEH C18。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC的柱温为30-50℃。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC的柱温为35-45℃。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述LC的流动相流速为0.1-1mL/min。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相由流动相水相A和流动相有机相B组成，所述流动相A为甲酸水溶液，其中甲酸的体积百分比浓度为0.01-1%，所述流动相B为甲酸的乙腈溶液，其中甲酸的体积百分比浓度为0.01-1%。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述LC检测采用梯度洗脱，洗脱程序包括：

0-1min，流动相B，5%，流动相A，余量；

1-30min，流动相B，5%→25%，流动相A，余量；

30-40min，流动相B，25%→50%，流动相A，余量；

40-50min，流动相B，55%→75%，流动相A，余量；

50-60min，流动相B，75%→100%；

60-60.1min，流动相B，100%→5%，流动相A，余量；

60.1-70min，流动相B，5%→stop，流动相A，余量。

12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对于所述LC-Q-TOF，所述Q-TOF的离子源为ESI，离子化模式：正离子，所述Q-TOF的扫描质量范围为400-3000m/z。

13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对于所述LC-Q-TOF，所述Q-TOF的去簇电压（DP）为250V。

14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对于所述LC-Q-TOF，所述Q-TOF的碰撞电压（CE）为10V。

15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对于所述LC-Q-TOF，所述Q-TOF的Accumulation time为0.15秒。