[发明专利]一种枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂的制备方法及用途

说明书

本发明公开了一种枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂的制备方法及用途，包括如下步骤：(1)将CTAC溶液、TEA和去离子水混合均匀制成水相；(2)取氯苯和TEOS混合均匀制成油相；(3)将油相滴加入水相后水浴，匀速搅拌，离心收集沉淀，清洗，箱干，产物研磨后煅烧，得UCMS；(4)称取LBP和UCMS，分散于去离子水中，超声处理后常温搅拌，得LBP‑UCMS溶液。本发明首次通过结合枸杞多糖和药物递送载体(超大介孔二氧化硅)两者的优势构建新型免疫佐剂，体现交叉学科的优势。与常规介孔二氧化硅相比，超大介孔二氧化硅可以装载更多的多糖发挥更佳的免疫作用。

技术领域

本发明涉及免疫佐剂制备方法及用途，特别涉及一种枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂的制备方法及用途。

背景技术

枸杞，甘、平，是一味药食同源的中药材。归肝、肺、肾经；滋肾，润肺，补肝，明目。枸杞中含有的枸杞多糖(LBP)具有促进免疫、抗衰老、抗肿瘤、清除自由基、抗疲劳、抗辐射、保肝、生殖功能保护和改善等多种作用。然而LBP临床应用中存在代谢快，靶向性差和用量大等缺点。因此，亟需寻求有效的方法解决这一问题。

药物递送系统是目前研究的热点。介孔二氧化硅(MSNs)就是一种很有希望克服传统佐剂缺点的新型纳米递送载体(诸如注射部位炎症、疼痛以及严重的急性毒性等)。它拥有高比表面积、大孔体积、生物相容性好、可功能化修饰等良好的性质，比传统的药物输送系统(如聚合物纳米颗粒，脂质体等)更灵活、更坚固。此外，MSNs制造工艺相对简单，成本显著降低，这对于满足未来的临床需求和商业化非常重要。目前介孔二氧化硅已被广泛作为亚单位疫苗的靶向递送载体，而超大介孔二氧化硅(UCMS)可以更容易吸附负载抗原、只需简单混合吸附即可，也可装载更多的抗原并抵抗胃肠液的破坏。

巨噬细胞是机体防御病原体的第一道防线，它既是一类重要的抗原提呈细胞，也是重要的炎症和免疫效应细胞，具有识别、吞噬、抗感染和免疫调节等多种免疫功能，在特异性免疫和非特异性免疫中起关键作用。鉴于巨噬细胞在机体免疫系统中的重要地位，

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂的制备方法。

技术方案：所述的枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将CTAC溶液、TEA和去离子水混合均匀制成水相；

(2)取氯苯和TEOS混合均匀制成油相；

(3)将油相滴加入水相后水浴，匀速搅拌，离心收集沉淀，清洗，箱干，产物研磨后煅烧，得UCMS；

(4)称取LBP和UCMS，分散于去离子水中，超声处理后常温搅拌，得LBP-UCMS溶液。

进一步地，所述步骤(3)采用无水乙醇、去离子水清洗。

进一步地，所述步骤(1)中将4.8mL 25wt％CTAC溶液、0.04g TEA和7.2mL去离子水混合均匀制成水相。

进一步地，所述步骤(2)中将3.5mL氯苯和0.5mL TEOS混合均匀制成油相。

所述方法制备得到的枸杞多糖超大介孔二氧化硅纳米佐剂在中药多糖新型免疫佐剂的研制及动物疫病药物中的用途。

本发明采用两相界面合成法制备UCMS并物理搅拌装载LBP，成功制备出LBP-UCMS。本发明以RAW264.7为研究的靶细胞，通过评估巨噬细胞的吞噬能力、细胞因子的mRNA含量和表面共刺激分子的表达量，测定LBP-UCMS对RAW264.7细胞的免疫调节作用。制备出的UCMS可装载更多的多糖，发挥更佳的免疫效果。产物LBP-UCMS可显著提高巨噬细胞分泌细胞因子的含量和表面标记分子的表达量，且更有效地刺激巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬能力，将为中药多糖新型免疫佐剂的研制及动物疫病的防控提供参考。