[发明专利]一种水解酶和一种(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法

权利要求书

1.一种水解酶，其特征在于，所述水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，以3-异丁基戊二酰亚胺为底物，在水解酶的催化下合成产物(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸；

其中，所述水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：向反应容器中加入3-异丁基戊二酰亚胺和水解酶制剂，控制反应体系的pH在7.0-9.0之间，在一定温度条件下进行反应；

S2：S1步骤反应完成后，将反应液进行加热冷却处理，之后加入助滤剂，经过滤，浓缩，再过滤，干燥后得(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸。

4.根据权利要求3所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S1中3-异丁基戊二酰亚胺的浓度为10-300g/L。

5.根据权利要求3所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的不对称合成方法，其特征在于，所述步骤S1中水解酶制剂包括酶液、酶粉、湿菌体、固定化酶。

6.根据权利要求5所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述水解酶酶液占反应体系总体积的5~20%。

7.根据权利要求3所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S1中还包括PB缓冲液，所述PB缓冲液的浓度为0.05M，且所述PB缓冲液的pH=7-8；

反应过程中用氨水、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠控制反应体系的pH；

所述反应温度为25-50℃；

优选地，反应过程中用氨水控制反应体系的pH在7.9-8.0之间；

优选地，所述反应温度为40℃。

8.根据权利要求3所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述步骤S2后处理操作进行浓缩时，加入盐酸或硫酸调解浓缩液的pH为2.5-4之间。

9.根据权利要求5所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，所述水解酶制剂的制备方法包括以下步骤：

P1：将表达所述水解酶的重组大肠杆菌湿菌体与缓冲液混合；

P2：在一定压力下进行均质破碎，得到酶液粗品；

P3：将酶液粗品离心，取上清液，即得所述水解酶酶液。

P4：将水解酶酶液冷冻干燥，即得所述水解酶酶粉。

P5：将水解酶酶粉与固定化载体使用共价键进行连接，即得重组大肠杆菌固定化酶。

10.根据权利要求9所述的(R)-(-)-3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸的合成方法，其特征在于，在步骤P1中，所述水解酶的重组大肠杆菌湿菌体与所述缓冲液的混合比例为1g：6mL。