[发明专利]基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺

权利要求书

1.基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：基因重组制备病毒菌抗原，制备的病毒菌抗原包括新冠病毒复合抗原、防龋齿抗原、幽门螺旋杆菌抗原、鼻炎抗原和哮喘抗原等一种或多种抗原；

步骤二：选择免疫动物，免疫动物选择高产母鸡；

步骤三：对步骤二中选择的免疫动物注射抗原，免疫周期为三个月，每个月免疫三次，最后一次免疫一周后收集鸡蛋；

步骤四：抗体的制备，从步骤三中收集的鸡蛋黄中分离出IgY等复合抗体，并计算鸡蛋中的抗体得率、抗体含量和抗体纯度，并对提取的抗体进行检测，检测该抗体对多种类型病毒的作用；

步骤五：检测步骤三中母鸡体内的抗体产生与否及滴度，并检测抗体的含量、纯度和活性；

步骤六：根据步骤四和步骤五中的检测结果，加入添加剂，调整IgY含量，用0.2um滤膜过滤除菌、病毒，灭活后进行灌装。

2.根据权利要求1所述的基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：步骤一中抗原的制备方法为：技术人员从主细胞库中提取作用人细胞表达出新型冠状病毒的S蛋白等多种蛋白，并把得到的多种蛋白注入昆虫细胞里，昆虫细胞把新型冠状病毒的结构蛋白带入自己的细胞里，用生物反应器进行昆虫细胞Baculovirus-InsectCell表达，His-tag纯化重组蛋白，并保证重组蛋白的纯度为93％，形成复合抗原。

3.根据权利要求1所述的基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：步骤二中，高产母鸡的最佳鸡龄为刚产蛋的鸡龄，步骤三中，抗原量在l0～1000trg，免疫动物的注射剂量为1～0.5mg。

4.根据权利要求1所述的基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：所述步骤四中抗原的制备方法为：分离步骤三中收集的鸡蛋的蛋清和蛋黄，留蛋黄备用，搅拌蛋黄，并在搅拌的过程中少量多次的添加去离子水，得到蛋黄的稀释液，把得到的稀释液用离心机进行离心，取离心出的上清液，测定上清液中的抗体滴度、抗体纯度和IgY等复合抗体含量，对剩余的液体进行再次离心，剩余的液体在离心力的作用下再次分层，取上清液，再次测定上清液中的抗体滴度、抗体纯度和IgY等复合抗体含量，并根据两次离心计算的结果计算抗体得率。

5.根据权利要求4所述的基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：在测定上清液前，需要对上清液进行过滤，并对过滤后的上清液进行检测。

6.根据权利要求1所述的基于基因重组抗突变病毒菌及真菌的口腔喷剂生产工艺，其特征在于：步骤五中用ELISA方法测每只鸡抗体的产生与否及滴度，ELISA测OD值，按公式：样品OD值/阴性对照OD值2.1判断为阳性，以最小阳性值对应孔的稀释倍数的倒数为最高滴度。