[发明专利]一种免标记比率荧光型检测抗原方法

权利要求书

1.一种免标记比率荧光型检测抗原方法，其特征在于，包括以下步骤：

对包含有CRISPR的识别DNA序列的单链进行设计，使其包含一段目标抗原的适配体，并通过数个连续的T碱基与识别DNA序列间隔，构建出组分A；

以目标抗原作为靶标，在96孔板上修饰目标抗原的抗体，并用牛血清白蛋白来封闭非特异性结合位点，构建出组分B；

将表面羧基化的二氧化硅微球与末端修饰有氨基的DNA链相连，另一条辅助DNA与修饰有氨基的DNA链互补配对形成双链，构建出组分C；

将待检测物中加入组分A、组分B、组分C、铜离子和抗坏血酸、DAPI染料、核酸外切酶III；

检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光，以比率荧光法进行目标抗原检测。

2.根据权利要求1所述的一种免标记比率荧光型检测抗原方法，其特征在于，其中，检测待检测物的红色荧光和蓝色荧光，进行目标抗原检测，主要包括：

如果待检测物中存在目标抗原：

则目标抗原与组分A的适配体连接，同时目标抗原与组分B的抗体结合，则不存在单链DNA，即不存在polyT和primer DNA；

由于不存在polyT，则无法与铜离子和抗坏血酸结合发出Cu 纳米簇，红色荧光弱；

由于不存在primer DNA，则不存在primer DNA与组分C的粘性末端互补配对，则组分C无法被核酸外切酶III剪切，DAPI染料可嵌入组分C的双链，蓝色荧光强；

则：

如果待检测物中目标抗原含量越低，则红色荧光越强、蓝色荧光越弱；

则：

令X=蓝色荧光强度：红色荧光强度

X值越大，目标抗原含量越高；X值越小，目标抗原含量越低。