[发明专利]一种星油藤六倍体植株的培育方法

说明书

本发明属于植物倍性育种领域，具体地说涉及一种星油藤六倍体植株的培育方法。所述方法包括无菌培养条件下用星油藤种子的胚乳诱导愈伤组织、游离原生质体并分选出三倍体原生质体、利用秋水仙素诱导三倍体原生质体加倍成六倍体、游离原生质体并分选出六倍体原生质体、将六倍体原生质体诱导培养形成六倍体植株的过程。本发明的优点在于原生质体阶段即可进行筛选，方法快速、高效、诱导率高，获得的多倍体材料能够通过增殖培养获得大量六倍体试管苗，极大地缩短了育种进程。

技术领域

本发明涉及作物倍性育种技术领域，具体地说，公开了一种星油藤六倍体植株的培育方法。

背景技术

星油藤(Plukenetia volubilis L.)又称为南美油藤、印加果和印加花生等，为大戟科(Euphorbiaceae)多年生木质藤本油料植物，主要利用部位是种子，富含油脂、氨基酸、维生素等，其中油脂主要是由α-亚麻酸、α-亚油酸和油酸等多元不饱和脂肪酸组成，三种不饱和脂肪酸含量占90％以上，显著高于花生、油菜、油茶等油料植物，尤其是α-亚麻酸这种人体必需脂肪酸的含量占油脂成分的45～53％，因此被认为是一种高端植物食用油，在食品、药品以及化妆品等领域具有广阔的应用前景。

星油藤于2006年引入我国后，在云南、贵州等省区进行引种栽培并获得成功。星油藤具有周期短、见效快、丰产性能好、可在山区和丘陵地区种植等特点。另外，星油藤当年种植，当年开花结果，一次种植后可连续收益多年，产值较高，是一种具有广阔发展前景的经济作物。但是星油藤为新引进物种，种质资源缺乏，制约了良种选育，不利于星油藤产业发展。植物多倍体化后花、果等生殖器官变大，次生代谢物含量提高，因此培育多倍体星油藤可能是提高星油藤油脂产量的途径之一。因此，本发明分开了一种星油藤六倍体植株的培育方法，具有操作性强、效率高、成本低、周期短等特点，可为促进星油藤多倍体育种，培育高油的星油藤新品种奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种星油藤六倍体植株的培育方法，本发明利用胚乳为三倍体的特点，并结合秋水仙碱能使染色体加倍的生物效应，通过组织培养培养，快速、高效获得星油藤六倍体植株，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种星油藤六倍体植株的培育方法，包括以下的工艺步骤：

(1)胚乳愈伤诱导：无菌条件下，星油藤种子常规消毒处理后，去除种皮，将胚及胚乳接种在愈伤组织诱导培养基中，在黑暗条件下培养30d后，剥离胚，胚乳继续培养诱导胚乳愈伤组织，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+1.0～3.0mg/L 6-BA+0.5～2.0mg/L NAA+0.5～1.0g/L水解酪蛋白+0.5～1.0g/L吗啉乙磺酸+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8；

(2)原生质体游离及分选：将胚乳愈伤组织置于4℃条件下黑暗处理24h后，用愈伤组织酶解液处理5～10h游离原生质体，然后用活体DNA染色剂(5～10μg/ml Hoechst33342)染色3～5min，在无菌条件下利用流式细胞仪筛选三倍体细胞，使其得到富集。所述的愈伤组织酶解液包括细胞壁水解酶和原生质体洗涤液，其中细胞壁水解酶为1.0～2.0％纤维素酶+0.5～1.0％离析酶+0.5～1.0％果胶酶，原生质体洗涤液为20～25mg/L KH₂PO4+90～100mg/L KNO₃+180～240mg/L MgSO₄·H₂O+0.1～0.2mg/L KI+0.01～0.02mg/L CuSO₄+1.0～1.5g/L CaCl₂·H₂O+0.5～0.8mol/L甘露醇+10～20μmol/L吗啉乙磺酸，pH为5.4～5.8；