[发明专利]细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用

说明书

本发明提供一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用，属于生物检测技术领域，一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，包括以下步骤：步骤1、动物脏器上包囊的收集：在疫区屠宰场查找带包囊脏器，取回实验室后，冻至冰箱；步骤2、将步骤1收集的包囊进行安全性验证；步骤3、将包囊中AgB抗原进行提取并纯化；步骤4、将步骤3提取的AgB抗原进行验证。本发明通过分离纯化囊液中特异的AgB抗原，利用荧光免疫层析技术，使得包虫感染抗体检测更准确。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用。

背景技术

棘球蚴病是由棘球绦虫（Echinococcus granulo-sus，E.g）的中绦期幼虫寄生在哺乳动物脏器内引起的疾病，是一种严重的人畜共患寄生虫病。抗原B（AgB）是由细粒棘球蚴病病原性幼虫产生的高丰度蛋白，是由原头节和包囊合成和分泌的，现有针对动物细粒棘球蚴病的检测中，对免疫抗体大多采用酶免试剂盒，针对感染抗体仅见到采用胶体金方法。

因此，需要提供一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用，以解决上述现有存在的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用。

为解决上述技术问题，本发明提供一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用。

一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，包括以下步骤：

步骤1、动物脏器上包囊的收集：在疫区屠宰场查找带包囊脏器，取回实验室后，冻至冰箱；

步骤2、将步骤1收集的包囊进行安全性验证；

步骤3、将包囊中AgB抗原进行提取并纯化：取不具有感染力的包囊，融化后在通风厨中剪开，收集囊液，将囊液离心后取上清，通过预包埋有多抗的免疫亲和柱进行层析纯化，收集过滤后的囊液，弃掉，用0.1M咪唑对亲和柱进行洗脱，收集目标物，即为AgB抗原，取500ul目标物放置于3万孔径的超滤膜中，加入2ml 0.01M pH7.2磷酸盐缓冲液，5000转/min离心10min，取超滤膜上层，即为AgB抗原；

步骤4、将步骤3提取的AgB抗原进行验证。

进一步的，所述步骤2的具体操作如下：

将步骤1取回包囊的脏器分别冻至-20±2度冰箱，-80±2度冰箱，1周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，2周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，3周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，4周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊。将饲喂过包囊的SPF羊隔离喂养7个月后，进行剖检发现，-20±2度冻存4周的包囊仍具有感染力，-80±2度冻存1周的包囊有感染力，冻存2周及之后的包囊饲喂SPF羊，剖检均未发现包囊，证明取回的包囊在-80度冰箱冻存2周后失去感染能力。

进一步的，所述步骤3中免疫亲和柱制备方法如下：

步骤3.1、AgB多抗包的制备：购买市售重组AgB抗原5mg，取0.5mg抗原进行乳化后，在新西兰大白兔背部进行多点皮下注射，以手触摸到鼓包为准，对兔子进行初次免疫；两周后取0.5mg抗原乳化后，进行二次免疫，再过两周后进行三次免疫，三免后一周采集兔子耳静脉血，用AgB抗原包被进行三免兔子血液的效价检测，效价不低于1：10000后，采集兔子耳静脉血20ml，37±2度放置2h，2--8度过夜，将处理后的血液均分至4个离心管中，5000转/min离心10min，取血清，硫酸铵沉淀法获得AgB多抗包；

步骤3.2、免疫亲和柱的制备：将AgB多抗包埋于琼脂糖凝胶上后，填入柱体中，制成特异免疫亲和柱，用于囊液中AgB抗原的纯化。

进一步的，将所述步骤3中细粒棘球蚴AgB抗原制备成试纸，包括以下步骤：