[发明专利]细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法及该抗原在包虫感染抗体检测上的应用

权利要求书

1.一种细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、动物脏器上包囊的收集：在疫区屠宰场查找带包囊脏器，取回实验室后，冻至冰箱；

步骤2、将步骤1收集的包囊进行安全性验证；

步骤3、将包囊中AgB抗原进行提取并纯化：取不具有感染力的包囊，融化后在通风厨中剪开，收集囊液，将囊液离心后取上清，通过预包埋有多抗的免疫亲和柱进行层析纯化，收集过滤后的囊液，弃掉，用0.1M咪唑对亲和柱进行洗脱，收集目标物，即为AgB抗原，取500ul目标物放置于3万孔径的超滤膜中，加入2ml 0.01M pH7.2磷酸盐缓冲液，5000转/min离心10min，取超滤膜上层，即为AgB抗原；

步骤4、将步骤3提取的AgB抗原进行验证。

2.根据权利要求1所述的细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，所述步骤2的具体操作如下：

将步骤1取回包囊的脏器分别冻至-20±2度冰箱，-80±2度冰箱，1周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，2周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，3周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊，4周后各取出含有2个10mm直径包囊的脏器，饲喂SPF羊；将饲喂过包囊的SPF羊隔离喂养7个月后，进行剖检发现，-20±2度冻存4周的包囊仍具有感染力，-80±2度冻存1周的包囊有感染力，冻存2周及之后的包囊饲喂SPF羊，剖检均未发现包囊，证明取回的包囊在-80度冰箱冻存2周后失去感染能力。

3.根据权利要求1所述的细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，所述步骤3中免疫亲和柱制备方法如下：

步骤3.1、AgB多抗包的制备：购买市售重组AgB抗原5mg，取0.5mg抗原进行乳化后，在新西兰大白兔背部进行多点皮下注射，以手触摸到鼓包为准，对兔子进行初次免疫；两周后取0.5mg抗原乳化后，进行二次免疫，再过两周后进行三次免疫，三免后一周采集兔子耳静脉血，用AgB抗原包被进行三免兔子血液的效价检测，效价不低于1：10000后，采集兔子耳静脉血20ml，37±2度放置2h，2--8度过夜，将处理后的血液均分至4个离心管中，5000转/min离心10min，取血清，硫酸铵沉淀法获得AgB多抗；

步骤3.2、免疫亲和柱的制备：将AgB多抗包埋于琼脂糖凝胶上后，填入柱体中，制成特异免疫亲和柱，用于囊液中AgB抗原的纯化。

4.根据权利要求1所述的细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，将所述步骤3中细粒棘球蚴AgB抗原制备成试纸，包括以下步骤：

步骤a、检测垫的制备；

步骤b、结合垫的制备；

步骤c. 将步骤a、步骤b的关键组分组装成试纸进行检测，与市售抗原组成的产品进行比对。

5.根据权利要求4所述的细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，所述步骤a的具体操作如下：

制备浓度为1.5mg/mL的AgB多抗包被液，浓度为1.6mg/mL的AgB抗原包被液，将两种包被液各自单独吸至划膜机管线中，均按照0.8μL/cm在硝酸纤维素膜上依次划出两条线，制得检测垫。

6.根据权利要求4所述的细粒棘球蚴AgB抗原的提取方法，其特征在于，所述步骤b的具体操作如下：

将荧光微球与步骤3中的AgB抗原进行连接后，经过封闭离心复溶制得结合垫。

7.一种如权利要求1-6任一项所述的细粒棘球蚴AgB抗原在包虫感染抗体检测上的应用。