[发明专利]一种检测血清中晚期糖基化终末产物的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测血清中游离晚期糖基化终末产物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括洗脱液、稀释液、蛋白沉淀剂、质控品；

所述蛋白沉淀剂为磺基水杨酸；

所述晚期糖基化终末产物包括：N-(羧甲基)-赖氨酸CML、N-(1-羧乙基)赖氨酸CEL、N⁶-甲酰基赖氨酸Formyl Lysine、N⁶-乙酰基赖氨酸Acetyl Lysine、N⁶-丙酰基赖氨酸lactoylLysine、N⁶-草酰基赖氨酸Oxalyl Lysine、N⁶-丙三醇基赖氨酸glycerinyl Lysine、N-(2-羟乙酰基)赖氨酸GALA、吡咯素Pyrraline、N-(羧甲基)-精氨酸CMA、N-(羧乙基)精氨酸CEA、N-(二甲基嘧啶)精氨酸Argpyrimidine、咪唑啉酮精氨酸G-H、甲基咪唑啉酮精氨酸MG-H、3-脱氧葡萄糖酮3DG-H、四氢嘧啶THP、乙二醛-赖氨酸二聚体GOLD、甲基乙二醛-赖氨酸二聚体MOLD、3-脱氧葡萄糖苷-赖氨酸二聚体DOLD、N⁶-乙二醛基赖氨酸二聚体GOLA、乙二醛赖氨酸-精氨酸二聚体GODIC、甲基乙二醛赖氨酸-精氨酸二聚体MODIC、戊糖苷素PEN、羧甲基半胱氨酸CMC中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白沉淀剂与血清样本的体积比为(1:4)～(1:1)。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括洗脱液A和洗脱液B；所述洗脱液A为九氟戊酸水溶液，所述洗脱液B为质谱纯乙腈。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为空白血清基质，所述质控品为以所述稀释液作为溶剂的溶液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述质控品包括4种，其中溶质分别是：浓度为1、50、100和500ng/mL的所述晚期糖基化终末产物。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括复溶液、标准品和内标液；

所述复溶液为甲酸：水溶液；所述复溶液中甲酸与水的体积比为甲酸：水＝1：99；

所述标准品为所述晚期糖基化终末产物与所述复溶液的混合溶液，混合标准品的浓度分别为1、5、10、50、125、250和500ng/mL；

所述内标液为晚期糖基化终末产物内标溶液与所述复溶液的混合溶液，所述晚期糖基化终末产物内标溶液为超纯水配制的CML-d4、GOLD-¹⁵N₂、G-H1-¹³C₂、MG-H1-d3和Pentosidine-d3的混合溶液。

7.一种检测血清样本中游离晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样本预处理：将血清样本用蛋白沉淀剂磺基水杨酸沉淀处理，离心取上清，氮气吹干，甲酸水溶液复溶；

(2)色谱分离：将步骤(1)预处理后的样本10～50μL上样至色谱柱，在流速为0.2～0.4mL/min，柱温35～45℃条件下，以梯度洗脱5～7min；

(3)质谱检测：取步骤(1)预处理后的样本，选择ESI正离子模式上样，采用多反应监测技术检测晚期糖基化终末产物；

(4)利用系列浓度的晚期糖基化终末产物标准品制备标准曲线，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算血清样本中所述游离晚期糖基化终末产物的含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述色谱柱为Waters AtlantisPremier BEH C18 AX，1.7um，100×2.1mm色谱柱。