[发明专利]表达载体、宿主细胞、抗肿瘤药物组合物及其应用

说明书

本发明公开了表达载体、宿主细胞、抗肿瘤药物组合物及其应用。其中，表达载体为由CD30‑CAR和CCR4串联共表达的表达载体；宿主细胞为包含经由CD30‑CAR和CCR4串联共表达的表达载体的巨噬细胞前体细胞或巨噬细胞；抗肿瘤药物组合物，包含由CD30‑CAR和CCR4串联共表达的表达载体或者包含该表达载体的宿主细胞；抗肿瘤药物组合物可以应用与制备增强CAR‑M免疫响应的药物、预防和/或治疗巨噬细胞免疫缺陷的药物或巨噬细胞免疫疗法治疗肿瘤的药物。

技术领域

本申请属于医药生物工程技术领域，具体涉及表达载体、宿主细胞、抗肿瘤药物组合物及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法在血液系统恶性肿瘤中显示出良好的应用前景，但在实体瘤/高肿瘤负荷淋巴瘤中的应用面临挑战，同时部分患者无法提供有效剂量的T细胞，且费用昂贵，在一定程度上限制了其应用。目前细胞过继免疫治疗的研发依然主要集中在构建更有效的CAR，以进一步增强CAR的靶向性、免疫杀伤性、效用持久性和安全性。

巨噬细胞在肿瘤微环境中的广泛浸润，抗原提呈功能，独特吞噬功能及穿透肿瘤的能力使其在实体瘤/高肿瘤负荷淋巴瘤应用方面显示出巨大的潜力。已有研究证明腺病毒载体克服了人原代巨噬细胞对遗传操作的固有抵抗力，不影响巨噬细胞趋化因子受体的表达，也不影响巨噬细胞的转运能力。利用腺病毒载体制备的CAR巨噬细胞(CAR-M)在多种小鼠模型中不仅发挥直接的抗原特异性吞噬作用，并且抗原处理能力增强，且与肿瘤特异性T细胞存在交叉作用。但CAR-M的肿瘤外非特异性作用是潜在的威胁，同时更适合CAR-M的共刺激结构域也需要进一步探索。

趋化因子与趋化因子受体的相互作用，在决定免疫细胞迁移方面起着关键作用。已有研究证明表达CCR4的CD30-CAR-T细胞在霍奇金肿瘤模型中有效改善了CAR-T细胞的迁移能力，增强了其抗肿瘤活性。但CCR4在CD8⁺ T细胞中的表达也可能产生一些理想之外的作用，如抑制T细胞的活性，减弱对肿瘤的杀伤作用，释放的细胞因子极性发生变化。因此，需要开发一种更加高效的基于巨噬细胞的新型免疫细胞疗法，以增强其对抗实体瘤/高负荷淋巴瘤的能力。

发明内容

有鉴于此，一方面，一些实施例公开了表达载体，该表达载体经由CD30-CAR和CCR4串联共表达。

另一方面，一些实施例公开了宿主细胞，该宿主细胞为包含经由CD30-CAR和CCR4串联共表达的表达载体的巨噬细胞前提细胞或巨噬细胞。

一些实施例中，巨噬细胞包括肿瘤组织、正常组织或脐带血来源的巨噬细胞。

一些实施例中，巨噬细胞前体细胞包括外周血、脐带血或骨髓来源的造血干祖细胞、诱导多能干细胞或胚胎干细胞。

一些实施例中，巨噬细胞前体细胞诱导分化为巨噬细胞。

一些实施例中，巨噬细胞前体细胞诱导分化为巨噬细胞的方法具体包括：依次采用Day0-LDM培养基、Day1-LDM培养基、Day5-LDM培养基培养巨噬细胞前体细胞，定向诱导分化为巨噬细胞；其中，Day0-LDM培养基为含有10％FBS和1×P/S的RPMI-1640分化培养基；Day1-LDM培养基为含有10ng/ml PMA、10％FBS和1×P/S的RPMI-1640分化培养基；Day5-LDM培养基为含有50ng/mL IFN-γ、15ng/mL LPS、10％FBS和1×P/S的RPMI-1640分化培养基。

再一方面，一些实施例公开了抗肿瘤药物组合物，包含由CD30-CAR和CCR4串联共表达的表达载体或者包含该表达载体的宿主细胞。

一些实施例公开的抗肿瘤药物组合物，还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任一组合。

又一方面，一些实施例公开了抗肿瘤药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。