[发明专利]一种微滴式数字PCR系统以及微滴生成方法

说明书

本发明公开了一种微滴式数字PCR系统及微滴生成方法，其中系统包括液滴生成装置，液滴生成装置包括至少一个水相注射装置、至少一个油相注射装置以及流通管道；所述水相注射装置的第一输出管道穿透所述第一端口，延伸至所述流通管道内部；所述油相注射装置的第二输出管道穿透所述第一端口，延伸至所述流通管道内部；所述水相注射装置用于注射水相试剂形成水相液滴，所述油相注射装置用于注射油相试剂形成油相液滴；所述流通管道用于使所述水相液滴与所述油相液滴结合形成乳化液滴；本申请技术方案具有结构简单、体积小以及样品间无扩散等优势，方案稳定性高，可广泛应用于生物科学技术领域。

技术领域

本发明涉及生物科学技术领域，尤其是一种微滴式数字PCR系统及微滴生成方法。

背景技术

聚合酶链反应(Quantitative Real-time，PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加，随着科技的发展，PCR技术越来越多地被运用到考古、刑侦及其他生物科学技术领域。

由PCR发展得到的数字PCR技术，是一种核酸分子绝对定量技术。基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种绝对定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，分析软件可计算给出待检靶分子的浓度或拷贝数。

然而现有的数据PCR系统所配套的微滴生成的方式或者方案，所液滴大小与频率很不稳定，或者其方案内容复杂，方案实施的门槛较高，且方案或者系统本身的稳定差，导致实验结果不尽如人意。

发明内容

有鉴于此，为至少部分解决上述技术问题之一，本发明实施例目的在于提供一种操作更为简便，且稳定性更高的微滴式数字PCR系统以及基于该系统的一种微流管道拉伸方法。

本发明所采取的技术方案是：

第一方面，本申请技术方案提供了一种微滴式数字PCR系统，系统包括液滴生成装置，液滴生成装置包括至少一个水相注射装置、至少一个油相注射装置以及流通管道；所述水相注射装置的第一输出管道穿透所述第一端口，延伸至所述流通管道内部；所述油相注射装置的第二输出管道穿透所述第一端口，延伸至所述流通管道内部；

所述水相注射装置用于注射样本试剂形成水相液滴，所述油相注射装置用于注射油相试剂形成油相液滴；所述流通管道用于使所述水相液滴与所述油相液滴结合形成乳化液滴。

在一些可选的实施例中，在所述流通管道内部，所述第一输出管道的延伸距离与所述第二输出管道的延伸距离相同。

在一些可选的实施例中，所述第一输出管道的截面与所述第二输出管道的截面外切，所述第一端口内壁截面与所述第一输出管道的截面，所述第一端口内壁截面与所述第二输出管道的截面内切。

在一些可选的实施例中，在所述流通管道内部，所述第一输出管道的延伸距离小于所述第二输出管道的延伸距离，所述第二输出管道与所述流通管道同轴，所述流通管道生成的乳化液滴为油包水乳化液滴，所述水相液滴为包含样本试剂的液滴。

在一些可选的实施例中，在所述流通管道内部，所述第一输出管道的延伸距离大于所述第二输出管道的延伸距离，所述第一输出管道与所述流通管道同轴，所述流通管道生成的乳化液滴为水包油乳化液滴，所述油相液滴为包含样本试剂的液滴。

在一些可选的实施例中，所述第一输出管道包括塑料毛细管或金属针头；所述第二输出管道包括塑料毛细管或金属针头。

在一些可选的实施例中，所述流通管道为铁氟龙管道。