[发明专利]抗AFP抗原VHH结构域及含有其的双特异性抗体

说明书

本发明公开了一种抗AFP抗原的VHH结构域及单域抗体，以及含有两种VHH结构域的双特异性抗体，所述抗体由两条不同的重链序列融合而成，可以分别识别AFP抗原的不同表位。所述单域抗体以及双特异性抗体均具有优异的抗体识别能力，显著的ADCC效应、并具有较长的体内半衰期，在体内外诊断和药物制备领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明公开了一种多肽，更具体地，公开了一种抗体，属于免疫学领域。

背景技术

肝细胞性癌（Hepatocellular carcinoma，HCC），是世界第五大癌症。甲胎蛋白（甲种胎儿蛋白，α-fetoprotein，AFP）最早是由Bergstrandh和Czar在人胎儿血淸中发现，是目前应用最广泛的HCC肿瘤标志物，被普遍应用于相关疾病的检查。AFP是一种糖蛋白，属于白蛋白家族，分子量为69kDa，一般情况下AFP主要由胚胎肝脏细胞分泌而来。因为其糖链结构的差异，AFP分子存在差异性，目前认为至少有三种异质体（AFP2L1，AFP2L2，AFP2L3）。AFP存在于人血清中，来源于早期胎儿的肝脏和卵黄囊，孕期4周即可在胎儿血清中检测到，最高可达l~3g/L，出生时仍高达60~120mg/L，出生后合成很快受到抑制，含量降至50μg/L，一周岁婴儿的血清AFP浓度水平接近成人。健康成人血清中AFP主要由肝脏产生，生理功能尚不清楚，可能与维持正常妊娠、调节脂肪酸进入胎儿体内及免疫抑制有关。正常成年人血清AFP水平非常低，一般低于10μg/L。肝细胞癌变时，AFP水平随着疾病进展会显著升高。目前，我国建议的临界值上限为20μg/L。AFP是我国目前在临床唯一推荐常规使用的肝细胞癌肿瘤标志物，同时结合超声检查，对无症状的高危人群进行筛查，是临床早期发现肝癌患者的最常用方法。随着医疗水平的不断提高，肝细胞癌的诊断和治疗水平不断进步，但肝细胞癌的临床死亡率仍居高不下。究其原因，与肝细胞癌发病隐匿，自觉症状不明显，造成就医确诊晚有关。提高肝细胞癌患者早期诊断率，同时在治疗过程中通过有效的方法手段进行监测是提高肝细胞癌治疗质量和生存率的关键所在。基于以上原因，目前首要任务是建立简单、快速、有效的检验方法。

不仅如此，自上世纪90年代以来，研究者利用AFP抗体作为载药载体，运输抗癌药物，如阿霉素、柔红霉素、顺铂、甲氨蝶呤等成为热门研究内容，通过胞吞作用将上述药物选择性转运至肿瘤细胞中，起到治疗作用。此外，Meng和Sauzay等研究发现，AFP可以与肝癌细胞膜上的受体结合，进而激活Ca²⁺和PI3/AKT等信号通路，通过上调c-fos、Srs、c-jun、Ras等癌基因的表达，促进肝癌细胞的增殖（Meng WenBo等，The immunosuppression role ofalpha-fetoprotein in human hepatocellular carcinoma，Discovery medicine，2016年21卷118期；Chloé Sauzay等，Alpha-foetoprotein(AFP):A multi-purpose marker inhepatocellular carcinoma，Clinica Chimica Acta，2016年463卷）。因此，可见AFP无论是在疾病的诊断、靶向治疗还是后期的预后监测方面都发挥着巨大的作用。

鉴于癌症生物标志物在癌症的早期诊断和治疗预后中起着重要的作用，其敏感检测在过去几十年里引起了巨大的研究浪潮。免疫分析就是其中一种检测方法。由于其特异性和稳定性的优势，已被广泛应用于癌症生物标志物的敏感检测，并用于基础研究和临床检测。目前，已开发出了多种类型的免疫分析方法：包括电泳免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法、比色法免疫分析法、质谱免疫分析法、表面拉曼增强光谱免疫分析。化学发光免疫分析法的灵敏度和精确度比酶联免疫吸附法、荧光法高几个数量级，且具有方法稳定快速、检测范围宽、操作简单、自动化程度高等优点，可用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等相关物质的检测分析。目前AFP检测方法大多使用的为传统抗体（鼠源单克隆抗体、兔源多克隆抗体以及山羊抗体），这些抗体分子量大，稳定性差等不足的特点，使得AFP检测灵敏度受到了一定的限制。