[发明专利]递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法及所得产品

说明书

本发明公开了一种递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法及所得产品，本发明以盐酸多巴胺修饰的八臂聚乙二醇和绿原酸等免疫环境调节剂为原料，通过与Fesupgt;3+/supgt;配位形成还原敏感二硫键的金属酚醛网络包裹抗原，得到纳米疫苗，能够有效被抗原递呈细胞摄取，递送抗原。本发明制备方法操作简便，能耗低，环境友好，易于扩大生产，所得纳米疫苗具有很好的体内长期稳定性和生物相容性，并对肿瘤具有显著的治疗和预防效果。

技术领域

本发明涉及一种递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法及所得产品，属于纳米材料制备技术领域。

背景技术

长期以来癌症一直是全球性威胁，肿瘤疫苗是一种治疗性疫苗，凭借其显示相对较小的副作用，有效的控制肿瘤的生长和转移逐渐走进人们的视野。聚乙二醇因其生物相容性高、价格低廉被生物材料广泛应用。绿原酸具有广泛的生物活性，现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血压、降血脂和清除自由基等作用。之前的研究发现，绿原酸（CHA）作为一种抗肿瘤免疫调节剂，通过促进STAT1激活和抑制STAT6激活促进巨噬细胞TAMs从M2极化到M1表型，从而调节肿瘤微环境并抑制多形性胶质母细胞瘤（GBM）的生长。I期临床试验报告表明，在复发性高级别胶质瘤患者中注射CHA是安全的、耐受性良好的，并具有潜在的抗肿瘤作用。然而，作为一种小分子化合物，CHA在注射后在体内迅速清除，从而导致循环时间短和肿瘤积聚率低。游离的卵清蛋白作为常用的肿瘤抗原，具有免疫原性低、易被降解的缺点，因此合理地设计载体有效负载抗原引起了国内外广泛的讨论。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法及所得产品，该方法通过八臂聚乙二醇与Fe离子配位，绿原酸等免疫环境调节剂作为金属多酚网络组成成分和佐剂对抗原进行包裹，使其同时具有pH和还原双响应性，以提高疫苗蛋白的靶向递送效率和交叉递呈，促进免疫应答。

金属酚网络（MPN）是由金属离子与多酚之间的配位相互作用建立的一系列超分子网络结构。MPN由于具有一些独特的优势，例如简单的合成以及与人体组织的良性生物相容性，因此可以用作生物材料。本发明基于金属多酚网络(Metal-Polyphenol Network，MPN)的合成原理，通过将接有多巴胺分子的八臂聚乙二醇、免疫环境调节剂和Fe³⁺配位，以卵清蛋白作为负载抗原，八臂聚乙二醇与Fe离子配位，免疫环境调节剂作为金属多酚网络组成成分和佐剂对抗原进行包裹，形成纳米疫苗。盐酸多巴胺和PEG是通过SPDP上的二硫键连接的，其细胞质内含有的还原性谷胱甘肽可以打开二硫键。纳米材料是通过包吞进入抗原递呈细胞的，然后在胞内形成溶酶体，溶酶体中的酸性条件可以打破Fe离子和多酚形成的配位键的平衡。因此，该纳米材料具有在还原性胞质溶胶或酸性溶酶体中智能释放OVA的潜力。抗原递呈细胞（APC）对抗原的递呈是免疫应答中非常重要的过程，APC对纳米材料的摄取是免疫应答的前提，较小尺寸的物质也更容易进入APC内，DC细胞作为主要的APC，摄取程度的大小也正面反应了免疫应答水平的高低。

本发明具体技术方案如下：

一种递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法，该方法包括以下步骤：

（1）将三乙胺、4-(2-氨基乙基)-1,2-苯二酚盐酸盐和N-琥珀酰亚胺基3-（2-吡啶基二硫代）丙酸酯先进行反应，然后再加入具有巯基末端的八臂聚乙二醇继续反应，得到邻苯二酚封端的八臂聚乙二醇；

（2）将步骤（1）得到的邻苯二酚封端的八臂聚乙二醇分散在水中，然后加入抗原溶液、FeCl₃溶液、免疫环境调节剂溶液和Tris-HCl缓冲液进行反应，得递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗。