[发明专利]递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法及所得产品

权利要求书

1.一种递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法，其特征是包括以下步骤：

（1）邻苯二酚封端的八臂PEG多酚（PEG Polyphenol）的合成：将24.6 mg、0.129 mmol的4-(2-氨基乙基)-1,2-苯二酚盐酸盐，28 µL、0.201 mmol的三乙胺和22 mg、0.07 mmol的N-琥珀酰亚胺基3-（2-吡啶基二硫代）丙酸酯（SPDP）溶解在5 mL DMF中，所得溶液在氮气保护下搅拌3 h，然后加入100 mg、分子量为20000、巯基的物质的量为0.04 mmol的带有巯基末端的八臂聚乙二醇，在氮气保护下再反应6 h，反应后，将混合物在pH为4-5的水中透析48h，以将未反应的小分子除去，透析后冻干，获得PEG Polyphenol；

（2）递送抗原和免疫环境调节剂的、具有pH和还原双响应的金属多酚纳米疫苗MPNs@OVA+CHA的制备：将上述的20 µL、50 mg/mL 的PEG Polyphenol溶液加入5 mL样品瓶中，然后加入500 µL、0.6 mg/mL的卵清蛋白溶液，室温下搅拌30 s，搅拌均匀后加入20 µL、3 mg/mL 的FeCl₃溶液，室温下搅拌30 s，混匀后加入200 µL、0.15 mM、pH=8.5的Tris-HCl溶液，室温下搅拌30 s，然后加入15 µL、4 mg/mL的绿原酸溶液，将混合溶液在室温下搅拌30 s，加入180 µL 、3 mg/mL 的FeCl₃溶液，磁力搅拌反应1 h；反应后，20000 r/min离心20 min，得到沉淀物，将所得沉淀物用纯水洗1次，以除去过量的PEG Polyphenol、FeCl₃、绿原酸和抗原，得到粒径约为50 nm的MPNs@OVA+CHA。

2.按照权利要求1所述的递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗的制备方法制得的递送抗原和免疫环境调节剂的金属多酚纳米疫苗。