[发明专利]基于N-羟乙基-1,8-萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物的聚集诱导发光微球及其应用

说明书

本发明公开了基于N‑羟乙基‑1，8‑萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物的聚集诱导发光微球及其应用，属于分析检测领域。聚集诱导发光微球以N‑羟乙基‑1，8‑萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物为AIE分子并通过溶胀法制备，随后用于制备定量检测氨基末端B脑钠肽免疫层析试纸条，该试纸条结构包括：PVC底板、硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫和吸水垫。聚集诱导发光微球标记的抗氨基末端B脑钠肽标记抗体喷涂在免疫层析试纸条的结合垫上，硝酸纤维素膜设有检测区(T线)和控制区(C线)，分别喷涂特异性标记抗体(包被抗体)和抗免疫球蛋白G抗体(二抗)。本发明与传统FITC荧光试纸条相比，灵敏度提高了14倍，具有操作简便、快速定量，便于携带，样品用量小等优点。

技术领域

本发明属于医学分析检测技术领域，具体涉及基于N-羟乙基-1，8-萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物的聚集诱导发光微球及其制备方法和应用。

背景技术

脑利钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)是分布于心脏中的一种激素，主要在心肌组织中发挥作用。此外，BNP和氨基末端脑钠肽前体(Nterminal pro-brainnatriuretic peptide，NT-proBNP)的测量结果也可以作为急性和慢性心力衰竭的诊断生物标志物。由于NT-proBNP 不易被降解、半衰期较长，可以作为较理想的预测指标。因此，开发一种快速，简便，廉价的快速检测方法实时定量检测NT-proBNP对于临床诊断和后期治疗确定方案具有重大意义。

免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法，具有检测速度快、特异性好、操作简单和费用低等优点，相比于其它方法更能满足现场大批量检测的需求，因此近年来发展迅猛，被广泛应用于医学检验、食品安全和环境污染物监测等领域。传统免疫层析方法由于探针信号强度弱而致灵敏度不高，无法满足一些高灵敏的定量检测需求。荧光探针由于信号强度高，发光稳定，被广泛应用于体外诊断，生物成像等领域。聚集诱导发光微球是一种新型荧光探针，由于其聚集或固态荧光增强的性能解决了大部分传统荧光染料浓度淬灭的瓶颈问题，使得这种材料成为了近年来的热门研究方向。另外，AIE荧光纳米粒子也因其高发光、低毒性、组织穿透力强、光稳定性和生物相容性等优点，有望成为荧光标记探针的替代品。

发明内容

针对现有技术中的不足与难题，本发明旨在提供一种基于N-羟乙基-1，8-萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物的聚集诱导发光微球及其制备方法和应用。

本发明通过以下技术方案予以实现：

本发明一方面提供一种基于N-羟乙基-1，8-萘二甲酰亚胺四苯乙烯衍生物的聚集诱导发光微球，其以N-2-(4-(三苯乙烯基-)-苯氧基-)-乙基)-4-(4-(三苯乙烯基)-苯基)-1，8- 萘二甲酰亚胺作为AIE分子，通过溶胀法将AIE分子渗透入聚苯乙烯微球内部制备而成；具体制备方法包括如下步骤：

(1)将N-2-(4-(三苯乙烯基-)-苯氧基-)-乙基)-4-(4-(三苯乙烯基)-苯基)-1，8-萘二甲酰亚胺作为AIE分子溶解在四氢呋喃溶液中，为A液；

(2)将羧基表面的聚苯乙烯微球分散于十二烷基磺酸钠水溶液中，为B液；

(3)将A液加入丙酮中混匀，再一边搅拌一边加入B液，室温下磁力搅拌10-20h蒸发丙酮至少量，离心得到产物用超纯水洗涤，获得的荧光聚苯乙烯纳米微球悬浮分散于超纯水中备用。

进一步地，步骤(1)中AIE分子结构式为：

步骤(1)中的A液浓度为25mg/mL

步骤(2)中聚苯乙烯微球粒径为250-350nm；

步骤(3)中B液与丙酮的体积比为1∶3；

B液中的聚苯乙烯微球与A液中AIE分子的质量比为1∶0.5-1.5。