[发明专利]一种基于Cas13a系统的检测外泌体的生物传感器

权利要求书

1.一种基于Cas13a系统的检测外泌体的生物传感器，其特征在于，包括：

核苷酸序列如SEQ NO: 1-7所示的EpCAM-Apt，P1探针，发卡探针H1、H2、H3、H4，Reporter探针和T7 RNA polymerase，Cas13a/crRNA；

所述Reporter探针的5’端和3’端分别连接荧光报告基团和荧光猝灭基团；

所述crRNA的核苷酸序列SEQ NO: 8所示。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述EpCAM-Apt和P1探针以Apt-P1探针代替，所述Apt-P1探针为EpCAM-Apt和P1探针杂交获得的双链。

3.一种包含如权利要求1或2所述的生物传感器的检测外泌体的试剂盒。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，还包括外泌体标准品、缓冲溶液。

5.一种采用如权利要求1或2所述的生物传感器或如权利要求3或4所述的试剂盒对外泌体进行检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）人工合成EpCAM-Apt，P1探针，发卡探针H1、H2、H3、H4，Reporter探针和crRNA；并获得Apt-P1探针和Cas13a/crRNA；

（2）将待测样品或外泌体标准品与Apt-P1探针在缓冲溶液中混合，反应30 min；然后加入H1、H2、H3、H4反应30-130 min；然后加入T7 RNA polymerase和Cas13a/crRNA于37 ℃反应30 min；然后加入Reporter探针，反应60min；设置激发波长为485nm，发射波长为520nm，检测荧光信号；

（3）根据外泌体标准品的荧光信号计算待测样品中外泌体含量。