[发明专利]一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法

说明书

本发明公开了一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法，涉及MDA‑MB‑231细胞转染领域。增强感染培养基用于提高MDA‑MB‑231细胞慢病毒感染率，增强感染培养基的组分包括Leibovitz’sL‑15培养基、RPMI‑1640培养基、胎牛血清、非必需氨基酸和表皮细胞生长因子；按照总原料的体积百分比计算，所述胎牛血清的添加量为10％，所述非必需氨基酸的添加量为1％；所述表皮细胞生长因子的添加量为2～3ng/ml。通过采用本发明的增强感染培养基，MDA‑MB‑231细胞可以在37℃和5％CO₂的常规环境下进行正常培养，且更为显著的提高了慢病毒对MDA‑MB‑231细胞的感染效率，使MDA‑MB‑231细胞基因编辑效率变得更高，解决了目前MDA‑MB‑231细胞慢病毒感染率低的问题。

技术领域

本发明涉及MDA-MB-231细胞转染领域，尤其涉及一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法。

背景技术

MDA-MB-231(人乳腺癌细胞)为分离自一名51岁的女性乳腺癌患者的胸水的人乳腺癌细胞，MDA-MB-231是具有高度侵入性和分化程度低的三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系，三阴性指缺乏雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR) 表达，以及HER2(人类表皮生长因子受体2)过表达，与其他侵入性癌细胞系类似，MDA-MB-231细胞的侵入性通过细胞外基质的蛋白解降解进行调解。

MDA-MB-231被广泛用于三阴性乳腺癌的相关研究，通过ZFN、TALEN、 CRISPR/Cas9技术进行基因编辑，从而建立基因敲除、敲入、点突变等细胞株是已经成为研究的主流手段，MDA-MB-231细胞常规转染方法是采用的慢病毒法，虽然能感染，但是效率比较低，只有30％左右，需要通过额外导入抗性基因进行筛选，提高感染率，但是通过药筛的方式富集的稳转细胞，细胞状态差， pool细胞和单克隆鉴定的敲除阳性率比较低，导致MDA-MB-231细胞基因编辑效率受到制约。

发明内容

针对背景技术提出的问题，本发明的目的在于提出一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，本发明的增强感染培养基用于提高MDA-MB-231细胞慢病毒感染率，通过采用本发明的增强感染培养基，MDA-MB-231细胞可以在37℃和5％CO₂的常规环境下进行正常培养，且更为显著的提高了慢病毒对MDA-MB-231 细胞的感染效率，使MDA-MB-231细胞基因编辑效率变得更高，解决了目前MDA-MB-231细胞慢病毒感染率低的问题。

本发明的另一目的在于提出一种提高MDA-MB-231细胞慢病毒感染率的方法，此方法能显著提高了MDA-MB-231细胞的慢病毒感染率，使MDA-MB-231 细胞基因编辑效率变得更高，解决了目前MDA-MB-231细胞慢病毒感染率低的问题。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一种提高细胞感染率的增强感染培养基，所述增强感染培养基用于提高 MDA-MB-231细胞慢病毒感染率，所述增强感染培养基的组分包括L15培养基、 RPMI-1640培养基、胎牛血清、非必需氨基酸和表皮细胞生长因子；

按照总原料的体积百分比计算，所述胎牛血清的添加量为10％，所述非必需氨基酸的添加量为1％；

所述表皮细胞生长因子的添加量为2～3ng/ml。

进一步的，所述增强感染培养基的组分还包括0.5～1ug/ml的氢化可的松或/ 和0.005～0.01ug/ml的胰岛素样生长因子-1。

进一步的，在所述增强感染培养基中，所述L15培养基和所述RPMI-1640 培养基的体积比为1：1。

进一步的，所述增强感染培养基的组分包括L15培养基、RPMI-1640培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、表皮细胞生长因子、氢化可的松和胰岛素样生长因子-1；