[发明专利]一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基及方法

权利要求书

1.一种提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，其特征在于，所述增强感染培养基用于提高MDA-MB-231细胞慢病毒感染率，所述增强感染培养基的组分包括Leibovitz’s L-15培养基、RPMI-1640培养基、胎牛血清、非必需氨基酸和表皮细胞生长因子；

按照总原料的体积百分比计算，所述胎牛血清的添加量为10％，所述非必需氨基酸的添加量为1％；

所述表皮细胞生长因子的添加量为2～3ng/ml。

2.根据权利要求1所述的提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，其特征在于，所述增强感染培养基的组分还包括0.5～1ug/ml的氢化可的松或/和0.005～0.01ug/ml的胰岛素样生长因子-1。

3.根据权利要求2所述的提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，其特征在于，在所述增强感染培养基中，所述Leibovitz’s L-15培养基和所述RPMI-1640培养基的体积比为1：1。

4.根据权利要求1所述的提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，其特征在于，所述增强感染培养基的组分包括Leibovitz’s L-15培养基、RPMI-1640培养基、胎牛血清、非必需氨基酸、表皮细胞生长因子、氢化可的松和胰岛素样生长因子-1；

按照总原料的体积百分比计算，所述胎牛血清的添加量为10％，所述非必需氨基酸的添加量为1％；

所述表皮细胞生长因子的添加量为3ng/ml，所述氢化可的松的添加量为0.5～1ug/ml，所述胰岛素样生长因子1的添加量为0.01ug/ml。

5.一种提高MDA-MB-231细胞慢病毒感染率的方法，其特征在于，使用如权利要求1-4任意一项所述的提高细胞慢病毒感染率的增强感染培养基，包括以下步骤；

(1)将MDA-MB-231细胞消化成单细胞悬液，将单细胞悬液接种至细胞培养板中，加入常规培养基，并在37℃和环境空气的条件下进行培养；

(2)待步骤(1)中的MDA-MB-231细胞培养至24～48h时，将常规培养基更换为增强感染培养基，并于37℃和体积分数为5％二氧化碳的环境下培养20～26h；

(3)维持步骤(2)的培养条件，使用带EGFP表达框的慢病毒感染MDA-MB-231细胞，感染时间为44～52h；

(4)感染完成后，将增强感染培养基更换为常规培养基继续培养，观察有EGFP荧光信号的MDA-MB-231细胞，并计算感染率。

6.根据权利要求5所述的提高MDA-MB-231细胞感染率的方法，其特征在于，所述步骤(1)的操作如下：将对数生长期的MDA-MB-231细胞消化成成单细胞悬液，按照1×10⁵/孔的细胞接种量将单细胞悬液接种至12孔细胞培养板中，加入1ml常规培养基，并在37℃和环境空气的条件下进行培养。

7.根据权利要求5所述的提高MDA-MB-231细胞感染率的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述带EGFP表达框的慢病毒的感染复数为30。

8.根据权利要求5所述的提高MDA-MB-231细胞感染率的方法，其特征在于，在所述步骤(1)和步骤(4)中，所述常规培养基为含谷氨酰胺和胎牛血清的Leibovitz’s L-15培养基。