[发明专利]肠癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法

说明书

本申请涉及生物组织工程技术领域，公开一种肠癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法，所述肠癌类器官培养液包括条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子。其中，复合抗生素包括Primocin，青霉素‑链霉素和甲硝唑；生长因子包括表皮细胞生长因子，N2，B27，乙酰半胱氨酸，烟酰胺，Gastrin，Prostaglandin E2，Y‑27632，HGF，IL‑6，SDF1。培养液各组分之间协同作用，加快肠癌类器官细胞的形成和生长，增加细胞收获数量的同时还提高培养速度。适用于人源肠癌类器官的培养，例如，小肠癌、直肠癌、结肠癌等。

技术领域

本申请涉及生物组织工程技术领域，例如涉及一种肠癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法。

背景技术

肠癌，包括结肠癌和直肠癌，是我国的十大恶性肿瘤之一。目前，肠癌的病因尚未完全清楚，目前认为主要是环境因素与遗传因素综合作用的结果。肠癌类器官，例如，结直肠癌类器官，是研究肠癌的优势模型。目前虽有一些肠癌类器官培养基的研究报道，但是其培养过程生长慢，增加时间投入成本。

在研发过程中，发现相关技术中至少存在如下问题：现有肠癌类器官的培养过程中，每次传代至少需要培养7天，甚至更多天，才达到传代要求。而且，获得的细胞量也非常少，为了收获更多的细胞，进行下游试验，需要时间更长，使得整个器官的构建过程缓慢，导致肠癌类器官研究的时间成本高。

发明内容

为了对披露的实施例的一些方面有基本的理解，下面给出了简单的概括。所述概括不是泛泛评述，也不是要确定关键／重要组成元素或描绘这些实施例的保护范围，而是作为后面的详细说明的序言。

本申请实施例提供一种肠癌类器官培养液、培养试剂组合及培养方法，以加快肠癌类器官细胞的生长，提高培养速度。

在一些实施例中，所述肠癌类器官培养液，包括，条件培养基、基础培养基、复合抗生素和生长因子；所述条件培养基与所述基础培养基的体积比为1～4﹕1；所述基础培养基包括Advanced DMEM/F12（优化后的杜氏改良Eagle培养基/营养混合物F-12），HEPES（4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸） 5～15 mM和Glutamax 0.5x～1.5x；所述复合抗生素包括Primocin 50～500 μg/mL，青霉素-链霉素0.5x～1.5x和甲硝唑2～10 μg/mL；所述生长因子包括：EGF（表皮细胞生长因子） 10～100 ng/mL，FGF-10（成纤维细胞生长因子10） 10～100 ng/mL，N2 0.25x～1.5x，B27 0.25x～1.5x，n-Acetylcysteine（乙酰半胱氨酸） 1～2mM，Nicotinamide （烟酰胺）5～20 mM，Gastrin 5～20 nM，Prostaglandin E2 0.2～2 μM，Y-27632 5～15 μM，HGF 10～50 ng/μL，IL-6 5～40 ng/μL，SDF1 3～30 ng/μL；所述条件培养基包括两种或三种蛋白条件培养基，其中所述蛋白条件培养基选自Wnt-3a（Wnt蛋白家族3a型蛋白）条件培养基，R-spondin1（R-spondin蛋白家族1型蛋白）、R-spondin3条件培养基和头蛋白条件培养基。

在一些实施例中，所述肠癌类器官培养试剂组合，包括：酶解液和前述的肠癌类器官培养液；所述酶解液包括基础培养基、Ⅰ型胶原酶、Ⅲ型胶原酶和Primocin；其中，所述Ⅰ型胶原酶的浓度为0.1～2 mg/mL，所述Ⅲ型胶原酶的浓度为0.1～1 mg/mL，所述Primocin的浓度为0.2～2 mg/mL；所述肠癌类器官培养液与所述酶解液独立包装。