[发明专利]用于细胞杀伤及出泡的纳米试剂、细胞微米囊泡及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于细胞杀伤及出泡的纳米试剂，其特征在于，所述纳米试剂包括透明质酸、第四代聚酰胺-胺树枝状高分子、阿霉素和酪氨酸激酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的用于细胞杀伤及出泡的纳米试剂，其特征在于，所述透明质酸、第四代聚酰胺-胺树枝状高分子、阿霉素和酪氨酸激酶抑制剂的质量比为5-20：10-30：2：1。

3.根据权利要求1所述的用于细胞杀伤及出泡的纳米试剂，其特征在于，所述酪氨酸激酶抑制剂优选为阿帕替尼、拉帕替尼、索拉非尼或达沙替尼中的一种或者多种。

4.一种权利要求1-3任一所述的用于细胞杀伤及出泡的纳米试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)向盐酸阿霉素的甲醇溶液中加入三乙胺，得到阿霉素的甲醇溶液；

(2)将第四代聚酰胺-胺树枝状高分子、阿霉素和酪氨酸激酶抑制剂阿帕替尼三种组分共溶于甲醇，并混合均匀；

(3)将混合溶液用氮气吹干；

(4)向步骤(3)干燥过的混合物中加入去离子水进行水化，涡旋形成纳米颗粒；

(5)将步骤(4)中得到的纳米颗粒离心去除沉淀得到纳米颗粒悬浮液；

(6)一边涡旋，一边向步骤(5)中得到的纳米颗粒悬浮液中加入透明质酸，形成所述纳米试剂；

(7)将步骤(5)中得到的纳米试剂透析除去未结合的透明质酸；

或者：

(8)向盐酸阿霉素的二甲基亚砜溶液中加入三乙胺，得到阿霉素的二甲基亚砜溶液；

(9)将阿霉素和酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼或索拉非尼或达沙替尼两种组分共溶于二甲基亚砜，并混合均匀；

(10)将混合溶液滴入到第四代聚酰胺-胺树枝状高分子的水溶液中，涡旋形成纳米颗粒；

(11)将步骤(10)中得到的纳米颗粒离心去除沉淀得到纳米颗粒悬浮液；

(12)一边涡旋，一边向步骤(11)中得到的纳米颗粒悬浮液中加入透明质酸，形成所述纳米试剂；

(13)将步骤(12)中得到的纳米试剂在透析除去未结合的透明质酸。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)或者步骤(13)中纳米试剂在截留分子量为250kDa的透析袋透析20-24小时，除去未结合的透明质酸。

6.一种权利要求1-3所述的纳米试剂在制备癌细胞杀伤试剂或者药物中的应用。

7.一种利用权利要求1-3任一所述的纳米试剂所制备的细胞微米囊泡。

8.一种权利要求7所述细胞微米囊泡的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将纳米试剂加入细胞培养液中进行培养，可以使细胞形成大量的细胞微米囊泡；

(2)将步骤(1)中得到的细胞及细胞囊泡收集，离心取上清液，去除大的细胞碎片；

(3)将步骤(2)中得到的细胞囊泡上清液超滤并清洗得到细胞微米囊泡溶液。

9.一种权利要求7所述的细胞微米囊泡在制备机体免疫刺激试剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述机体免疫刺激试剂包括肿瘤疫苗刺激制剂。