[发明专利]一种尿液中有机磷酸酯检测方法

说明书

本发明提供一种尿液中有机磷酸酯检测方法，包含如下步骤：预处理尿液样品；进行固相萃取；对处理后的尿液样品进行液相色谱串联质谱分析，以内标法建立标准曲线，计算样本平均回收率和相对标准偏差，并与标准参考物质比较；目标物质包括10种有机磷阻燃剂代谢物和6种有机磷杀虫剂代谢物。利用固相萃取法同时对人体尿液中10种有机磷阻燃剂代谢物和6种有机磷杀虫剂代谢物进行提取，前处理时间短，样品需求量少；采用超高效液相色谱串联质谱进行定性定量分析，方法高效灵敏；目标物加标回收率在79‑127%之间，符合检测方法学的要求；日内精确度和日间精确度分别为0.9‑12.3%和2.1‑12.9%，所有的数据均符合国际标准协议的生物分析标准。

技术领域

本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种尿液中有机磷酸酯检测方法。

背景技术

随着多溴二苯醚（polybrominated diphenyl ether，PBDEs）逐步禁用，有机磷阻燃剂（organophosphate flame retardant，OPFRs）作为PBDEs的替代品，近年来其生产和使用量逐步增加。有机磷类杀虫剂（organophosphate pesticides，OPs）是目前我国使用最广泛的杀虫剂之一，被大规模应用到农业生产中。OPFRs在结构上与OPs（如毒死蜱）类似，而OPs是已知的神经毒物。长期低剂量OPFRs和OPs暴露对普通人群健康的不良影响目前已引起人们的重视。人体暴露于OPFRs和OPs后主要以代谢产物的形式通过尿液排出体外。OPFRs在体内脱侧链形成的磷酸二酯化合物和OPs在体内代谢形成的二烷基磷酸酯化合物（dialkyl phosphates，DAPs）已被分别用作是OPFRs和OPs暴露的生物标志物。因此，测定人体尿液中OPFRs的二酯代谢物水平和OPs的非特异性代谢产物DAPs水平分别是目前国内外大多数研究评价人群日常OPFRs和OPs暴露水平的主要方法。

人体尿液样品中成分复杂，而有机磷酸酯类代谢产物成分在样品中又以痕量存在，如何实现高效快速、样品量少而灵敏度高的检测分析过程存在不小的障碍。样品的预处理环节对检测过程十分重要，通常占据全过程的70-90%的分析时间。

发明内容

为解决上述人体尿液检测有机磷酸酯类代谢产物，难以实现高效快速、样品量少而灵敏度高的检测分析过程的技术问题，本发明提供一种尿液中有机磷酸酯检测方法，具体如下：

一种尿液中有机磷酸酯检测方法，

包括以下步骤：

将尿液进行预处理，处理后尿液经稀释加入醋酸-醋酸铵缓冲溶液，将尿液pH值调节至4.5至7；

进行固相萃取，净化萃取尿液样本中的目标物质，以甲酸甲醇溶液和甲酸水溶液对萃取柱进行活化后添加尿液进行吸附，萃取后经淋洗，采用氨甲醇溶液进行洗脱，将获得的洗脱液在氮气下吹干，用甲醇水溶液进行复溶；

对处理后的尿液样品进行液相色谱串联质谱分析，以内标法建立标准曲线（见图5），计算样本平均回收率和相对标准偏差，并与标准参考物质比较；

其中，目标物质包括DMP、DMTP、DMDTP、DEP、DETP、DEDTP、BCEP、BCIPP、BDCIPP、DPHP、DiBP、DnBP、DoCP、DmCP、DpCP和BBOEP；

所述液相色谱串联质谱分析的条件为：

流动相由A相0.1％甲酸水溶液和B相0.1％甲酸乙腈溶液；

色谱柱为Waters Acquity UPLC HSS T3 column (1.8 μm × 2.1 mm × 100mm)；

洗脱方式：梯度洗脱；

所述梯度洗脱为：

流动相B以0％初始浓度保持1分钟（流动相A为100%），在5分钟内增加到50％（流动相A为50%），在9.5分钟内上升到100％并保持1.5分钟（流动相A为0%），在0.1分钟内返回到0％并保持1.9 分钟直至平衡下一个样品（流动相A为100%），所有分析物在13分钟内完成分析；

质谱条件为：