[发明专利]一种抑制blaNDM基因表达的肽核酸及其应用

说明书

本发明提供一种抑制blaNDM基因表达的肽核酸及其应用，即一种针对blaNDM基因的反义肽核酸，该肽核酸的序列为5′‑GCAATTCCAT‑3′。本发明提供的PNA能特异性抑制blaNDM基因的表达，Western Blot实验检测共培养后菌株的NDM蛋白表达水平降低，肉汤稀释法检测菌株对碳青霉烯类药物亚胺培南及美罗培南耐药水平降低，该PNA能够高效特异地抑制blaNDM基因的表达并逆转碳青霉烯类抗生素耐药性。此外，PNA几乎不与蛋白质作用，因而毒性作用很小。PNA与DNA或RNA的杂交几乎不受杂交体系盐浓度影响。基于上述特性，本发明所述的PNA在NDM相关耐药病原菌抗感染治疗方面显示出广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种抑制blaNDM基因表达的肽核酸，及利用该肽核酸抑制blaNDM基因表达来逆转携带blaNDM基因菌株的碳青霉烯类抗生素耐药性。

背景技术

新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)是一种与质粒相关的Ambler B类β-内酰胺酶。2008年首次从一名在印度感染的瑞典患者身上分离的肺炎克雷伯菌中发现该酶。随后，NDM带来的耐药性以克隆方式迅速传播到世界各地，并扩散到许多革兰氏阴性病原体中，包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌等。目前已发现blaNDM-1至blaNDM-31等数十个亚型，且呈散在分布，但以blaNDM-1和blaNDM-5检出率最高、流行最广泛。

NDM危险性高，因为它会赋予菌株碳青霉烯类抗生素耐药性，而碳青霉烯类抗生素(Carbapenems)是目前抗菌谱最广、抗菌活性最强的抗生素之一,一度被视为治疗严重细菌感染的最后采纳的手段。同时，NDM会伴随有其他耐药基因，其种类覆盖了大部分可用抗生素类别。

尽管β-内酰胺酶抑制剂已被批准用于人类联合用药，但它们主要对丝氨酸(A类)和ampC(C类)β-内酰胺酶有效，对包括NDM在内的金属β-内酰胺酶均无效。研究表明，NDM菌株已占我国碳青霉烯耐药肠杆菌科菌(Carbapenem Resistant Enterobacteriaceae，CRE)构成比的33.5％，且感染致死率最高可达43.1％，严重威胁国民健康。因此，寻找低毒高效的NDM抑制剂意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制blaNDM基因表达的肽核酸及其应用，即一种针对blaNDM基因的反义肽核酸，该肽核酸可高效抑制blaNDM基因表达从而逆转相关菌株的碳青霉烯类抗生素耐药性，可用于制备靶向沉默NDM表达及与抗生素联合抗感染的小分子药物。

本发明所提供的肽核酸PNA，其序列为5′-GCAATTCCAT-3′(SEQ ID NO:1)；

本发明还提供所述的肽核酸在抑制blaNDM基因表达中的应用；

本发明还提供一种用于抑制blaNDM基因表达的制品，所述的制品中包含有药理有效浓度的上述的肽核酸；

更进一步的，所述的肽核酸与透膜肽偶联；

作为实施例的具体记载，所述的透膜肽为透膜肽(RXR)4XB。

本发明还提供一种预防治疗NDM相关耐药病原菌的制品，所述的制品中包含有抗生素和上述的肽核酸PNA。

本发明提供的PNA能特异性抑制blaNDM基因的表达，Western Blot实验检测共培养后菌株的NDM蛋白表达水平降低，肉汤稀释法检测菌株对碳青霉烯类药物亚胺培南及美罗培南耐药水平降低，该PNA能够高效特异地抑制blaNDM基因的表达并逆转碳青霉烯类抗生素耐药性。此外，PNA几乎不与蛋白质作用，因而毒性作用很小。PNA与DNA或RNA的杂交几乎不受杂交体系盐浓度影响。基于上述特性，本发明所述的PNA在NDM相关耐药病原菌抗感染治疗方面显示出广阔的应用前景。

附图说明