[发明专利]一种扩展定量检测范围的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提出一种扩展定量检测范围的试剂盒及检测方法，包括载体，所述载体上设置有标记位点、T线、C线，所述标记位点含有与样本抗原发生特异性反应的被信号粒子标记的标记抗体，T线固定有与样本抗原和标记抗体发生双抗体夹心反应的捕获抗体，所述捕获抗体由与样本抗原的结合能力高低不同的两种抗体混合而成，C线固定有与标记抗体发生双抗体夹心反应的抗原‑抗体偶联物。T线上的捕获抗体由两种结合能力不同的抗体混合，延缓了HOOK效应的产生，C线上采用定向包被方法，对更高浓度的待测样本而言，在与样本抗原竞争标记抗体时抗原‑抗体偶联物能表现出更显著的竞争梯度，扩宽了C线的下降范围，扩展了对大分子蛋白的定量检测范围。

技术领域

本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，尤其涉及一种扩展定量检测范围的试剂盒及检测方法。

背景技术

免疫分析法是利用抗原抗体特异性结合反应检测复杂样本中药物、激素、蛋白质、微生物等物质存在或者浓度的分析方法。按照反应机制的不同，免疫分析可以分为竞争法和非竞争法。其中非竞争法是将待测抗原与足够的标记抗体充分反应形成抗原-标记抗体偶联物，产生的信号强度与抗原的量成正比。竞争法是将待测抗原与定量标记抗原（直接竞争）或者固定抗原（间接竞争）竞争结合形成定量的特异性抗体-抗原偶联物，待测抗原的量越大，与抗体结合的标记抗原或者固定抗原的量越少，产生的信号强度越小，由此确定待测抗原的量。非竞争法中经典的双抗体夹心免疫反应的原理是以抗原为检测靶标，在固相载体的表面通过物理吸附或者化学检核的方式固定捕获抗体，溶液中抗原分别与标记抗体和捕获抗体结合，进而形成捕获抗体-抗原-标记抗体三元复合物，通过对标记抗体上标记物的检测，实现对抗原的定量检测。这种技术已经广泛应用于临床、环境、视频、海关等的检测中。当被测抗原的浓度较低时，双抗体夹心免疫检测的信号强度随待测抗原浓度增加呈现单调递增的关系；而当标本中的待测抗原浓度较高时，双抗体夹心免疫检测的信号强度将脱离现有线性关系增长缓慢，当标本中的待测抗原浓度继续升高时，信号强度逐渐趋于平缓甚至出现降低，从而使免疫检测失去准确定量高浓度待测抗原的能力，造成假阴性结果导致误诊。

上述现象称为HOOK效应，产生原因是因为当待测样本中抗原浓度很大时，一部分待测抗原与标记抗体部分处于游离状态，然后一起向检测线层析，占据检测线，与标记抗体偶联的抗原与检测线反应减少，因此检测线上信号值增长缓慢甚至出现降低的情况。