[发明专利]一种扩展定量检测范围的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种扩展定量检测范围的试剂盒，包括载体，所述载体上设置有标记位点、T线、C线，其特征在于，所述标记位点含有与样本抗原发生特异性反应的被信号粒子标记的标记抗体，T线固定有与样本抗原和标记抗体发生双抗体夹心反应的捕获抗体，所述捕获抗体由与样本抗原的结合能力高低不同的两种抗体混合而成，C线固定有与标记抗体发生双抗体夹心反应的抗原-抗体偶联物。

2.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，所述载体为微流控芯片，包括相互扣合的盖片和底片，盖片沿样本流动方向分别设有加样孔、微通道和废液槽，底片正对微通道的区域沿样本流动方向依次设置有标记区和检测区，所述T线和C线沿样本流动方向依次设置在检测区内，样本经加样孔流入微通道，流经标记区后进入检测区进行生化反应，最终流入废液槽后中止反应，反应时间为2-10min。

3.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，所述T线上结合能力高的抗体与结合能力低的抗体混合摩尔比例为1：1-1：20。

4.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，所述C线上抗体与抗原的摩尔比为1:0.5-1：5。

5.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于， C线上的抗原-抗体偶联物为生物素化的抗体和特异性抗原偶联而成。

6.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，所述载体上的T线和C线预先包被有亲和素/链霉亲和素。

7.根据权利要求1所述扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，所述信号粒子包括但不限于荧光粒子、磁微粒、乳胶微粒中的一种。

8.一种定量检测大分子蛋白的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-7中任一试剂盒进行检测，所述检测方法包括如下步骤：

S1，标准曲线的绘制：将一系列浓度的待测样本标准品分别用上述试剂盒反应2-10分钟，得到所述T线和C线的信号值之比；重复上述步骤3-5次，得到T线和C线的信号值之比的平均值，以其为纵坐标、待测样本标准品的浓度为横坐标得到标准曲线；

S2，向试剂盒中滴加定量的待测样本，使样本与试剂盒反应2-10分钟后，得到T线和C线的信号值之比；

S3，通过对比标准曲线上的纵坐标值得到待测样本的浓度。

9.一种扩展定量检测范围的试剂盒，其特征在于，采用权利要求1-7中任一试剂盒，取消载体上标记位点，所述载体上只设置有T线和C线，T线固定有与样本抗原发生特异性反应的捕获抗体，捕获抗体是由与样本抗原的结合能力高低不同的两种抗体混合包被而成，C线固定有与标记抗体发生特异性反应的抗原-抗体偶联物。

10.一种定量检测大分子蛋白的检测方法，其特征在于，采用权利要求9中的试剂盒进行检测，所述检测方法如下步骤：

S1，标准曲线的绘制：将一系列浓度的待测样本标准品分别与定量的标记抗体溶液混合形成混合溶液，将上述混合溶液流经试剂盒反应2-10分钟，得到所述T线和C线的信号值之比；重复上述步骤3-5次，得到T线和C线的信号值之比的平均值，以其为纵坐标、待测样本标准品的浓度为横坐标得到标准曲线；

S2，将待测样本与标记抗体混合，形成二者的混合溶液；

S3，向试剂盒中滴加定量的与标记抗体混合的待测样本，使样本与试剂盒反应2-10分钟后，得到T线和C线的信号值之比；

S4，通过对比标准曲线上的纵坐标值得到待测样本的浓度。