[发明专利]一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法

说明书

本发明涉及一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法，本发明的方法是一种利用酵母展示和酵母交配系统实现筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度，根据本发明的方法，将TCR和pMHC分别展示到不同交配型酵母表面，然后进行酵母交配实验，进而通过酵母交配系统中TCR与pMHC互相作用形成的二倍体酵母细胞来筛选并确定TCR及其与特定抗原相互作用强度。同时通过计算所述筛选并确定出的每种TCR序列的差异倍数(fold change)值，由此确定出与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度。

技术领域

本发明涉及一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法，本发明的方法是一种利用酵母展示和酵母交配系统实现筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度，根据本发明的方法，将TCR和pMHC分别展示到不同交配型酵母表面，然后进行酵母交配实验，进而通过酵母交配系统中 TCR与pMHC互相作用形成的二倍体酵母细胞来筛选并确定TCR及其与特定抗原相互作用强度。同时通过计算所述筛选并确定出的每种TCR 序列的差异倍数(fold change)值，由此确定出与特定抗原相互作用的 TCR及其与特定抗原相互作用强度。

背景技术

TCR(T cell receptor，T细胞抗原受体)是T细胞表面的特异性T 细胞受体，是一种能够识别内/外源性抗原的分子，可以实现对特定受损伤细胞的杀伤和清除，同时可以介导免疫应答，在免疫应答和免疫调节中发挥着重要的作用，该受体也是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构，通常与CD3分子呈复合物形式存在于T细胞表面。在T细胞识别抗原的过程中，受体TCR和主要组织相容性复合体(Major HistocompatibiltyComplex,MHC)提呈的 pMHC(抗原分子多肽或肽-MHC)之间密切结合，从而激活T细胞，即T细胞受到抗原刺激后，分化、增殖、转化为活化的T细胞，产生对抗原的直接杀伤作用及活化T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用的免疫效应。肿瘤细胞免疫疗法(TCR-T)就是利用与目标肿瘤抗原特异性结合的T细胞，从而实现杀伤、清除肿瘤细胞的治疗方法。

TCR识别pMHC激活免疫应答对于维持人体的健康至关重要，体外进化出的高亲和力的TCR能够提高改造T细胞的抗肿瘤能力。其中，最能代表T细胞应答特征的分子为TCR高变区域CDR3(第三互补决定区),该区域是TCR主要的抗原结合部位,对TCR CDR3库进行研究,将为 T细胞生理和病理特征的全面解析提供基础。

目前，研究筛选高亲和力TCR的方法主要是通过噬菌体展示和酵母展示的方式进行。

噬菌体展示技术(Phage Display Technology)的本质是一种筛选技术。将不同的外源基因分别插入噬菌体载体中,随着噬菌体的传代,外源蛋白会展现在噬菌体表面,形成噬菌体文库。

酵母展示技术是一种真核蛋白表达系统，其利用酵母细胞表面展示系统(拥有完善的蛋白质翻译后修饰和分泌机制)将异源真核蛋白固定并展示在酵母细胞表面，已在蛋白质文库筛选、蛋白质定向进化、高亲和性抗体分选、抗原/抗体库构建、亲和力成熟、疫苗生产、免疫生物催化和生物传感器等多个领域应用广泛。目前的酵母展示技术多以四聚体蛋白的形式的pMHC为研究对象，筛选TCR的序列。