[发明专利]一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法在审
| 申请号： | 202210209696.3 | 申请日： | 2022-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN115792238A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 蓝勋;王莉惠 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;C07K14/725;C12N1/19;C12Q1/6869;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 邰红 |
| 地址： | 100084*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 确定 特定 抗原 相互作用 tcr 及其 强度 方法 | ||
1.一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法，其包括：
(a)将所述特定抗原-MHC复合物(pMHC)和TCR文库分别展示到不同交配型酵母表面；
(b)共培养所述不同交配型酵母；
(c)筛选出酵母细胞二倍体，并确定出所述酵母细胞二倍体中的TCR序列；
(d)计算所述确定出的每种TCR序列的差异倍数(fold change)值；
由此确定出与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度；
优选地，所述展示TCR的酵母细胞以整合形式表达TCR；
优选地，所述展示pMHC的酵母细胞以整合形式表达pMHC。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述交配缺陷型酵母细胞是Sag1基因缺失的酵母细胞。
3.根据权利要求1-2所述的方法，其中所述酵母细胞是酿酒酵母，优选所述酿酒酵母为EBY100菌株或EBY100菌株的遗传改造菌株。
4.根据权利要求1-3所述的方法，其中确定所述酵母细胞二倍体的TCR和pMHC的序列是使用二代测序方法进行确定。
5.根据权利要求1-4的方法筛选出的TCR序列。
6.一种共培养物，其包含展示一种特定抗原-MHC复合物(pMHC)的酵母细胞和展示多种TCR的酵母细胞，其中展示TCR的酵母细胞和展示pMHC的酵母细胞属于不同的交配型；
其中所述酵母细胞是交配缺陷型的；
优选地，所述展示TCR的酵母细胞是以整合形式表达TCR；
优选地，所述展示pMHC的酵母细胞是以整合形式表达pMHC。
7.根据权利要求6所述的共培养物，其在用于筛选能够与一种特定抗原结合的TCR序列的用途。
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