[发明专利]一种山羊痘病毒的定量检测方法

权利要求书

1.一种山羊痘病毒的定量检测方法，用于对待测样品中的山羊痘病毒进行定量检测，其特征在于：包括下述步骤：

(1)液相色谱检测山羊痘病毒样品，对目标峰进行鉴定，制备标准品；

(2)测定标准品中抗原浓度；

(3)取标准品进行系列稀释，用液相色谱法进行检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程；

(4)待测样品进行离心澄清；

(5)对待测样品用步骤(3)所述的液相色谱法进行检测得到对应的峰面积；

(6)根据线性回归方程及样品中山羊痘病毒的峰面积计算得到待测样品中的山羊痘病毒含量。

2.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)中，采用山羊痘病毒特异性检测法对目标峰进行鉴定，即病毒与MDBK细胞反应后发生明显的病变，空白对照无病变发生。

3.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，用蛋白测定仪测定标准品中抗原浓度。

4.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)、(3)、(5)中所使用的液相色谱法，流动相为磷酸盐缓冲液和甲醇的混合液；优选地，所述流动相中，磷酸盐缓冲液为10mM～30mM磷酸盐缓冲液，甲醇的体积百分比为5％～15％；所述流动相，磷酸盐缓冲液优选为10mM磷酸盐缓冲液，甲醇的体积百分比优选为10％。

5.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(3)、(5)中所使用的液相色谱法，流动相的流速为1.0ml/min。

6.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(3)、(5)中所使用的液相色谱法的进样量为50μl。

7.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)、(3)、(5)中所使用的液相色谱法，使用的色谱柱为凝胶色谱柱，检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm。

8.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：步骤(1)、(3)、(5)中所使用的液相色谱法的凝胶色谱柱为Bio Basic SEC-2000或Sephacryl S-500。

9.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：

步骤(4)中，所述待测样品选自含山羊痘病毒的悬浮培养液或纯化液或山羊痘灭活疫苗的任意一种。

10.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的定量检测方法，其特征在于：

步骤(4)中，所述待测样品山羊痘病毒悬浮培养液或纯化液采用3000～5000r/min离心5～10分钟进行澄清，取上层澄清液待测；待测样品山羊痘灭活疫苗需先解离后，再进行澄清；解离条件为疫苗:正丁醇＝3:1～9:1，混合震荡1～3分钟，2～8℃下静置30分钟，取下层澄清液，采用3000～5000r/min离心5～10分钟进行澄清，取上层澄清液待测。

步骤(3)中，取已确定抗原含量的山羊痘病毒标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行色谱检测，建立以峰面积为横坐标、浓度为纵坐标的线性回归方程，R²应大于0.99。