[发明专利]一种少突胶质细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种制备少突胶质细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）生成PAX6 +/NESTIN+/SOX2+的NSC：从第0天到第7天，将人诱导多能干细胞用神经诱导培养基培养，并每天更换培养基；

（2）从第8天开始，每天将培养基更换为含有视黄酸、Purmorphamine和CB受体激动剂的新鲜N2培养基；

（3）从第12天开始，将细胞手动分离并悬浮在含有视黄酸、Purmorphamine和CB受体激动剂的N2B27培养基中，每隔一天更换培养基；

（4）从第20天开始，球体在PDGF-AA培养基中进一步悬浮培养；

（5）从第30天开始，将膨胀的球体接种并在神经胶质分化培养基中的低生长因子的基质凝胶包被板或培养皿上培养16-36天；

其中步骤（2）和（3）中的培养基中所述的视黄酸浓度为10-1000nM，Purmorphamine浓度为0.1-10μM，CB受体激动剂浓度为1μM，其中所述CB受体激动剂为WIN55212-2。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，将步骤（1）替换为PAX6 +/NESTIN+/SOX2+的NSC成品。

3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述的人诱导多能干细胞在基质凝胶包被的六孔板上培养，在37°C培养箱中使用mTeSR™培养基，CO₂为5%的培养箱。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的视黄酸浓度为100nM，Purmorphamine浓度为1μM，CB受体激动剂浓度为1μM。

5.权利要求1-4任一项所述的制备少突胶质细胞的方法在用于制备治疗脱髓鞘疾病或髓鞘损伤疾病的药物中的应用；

所述脱髓鞘疾病包括脊髓损伤、脑卒中、多发性硬化、视神经脊髓炎、格林-巴利综合症、弥散播散性脑脊髓膜炎、急性播散性脑脊髓炎、同心圆硬化、弥漫性硬化、脑白质营养不良、缺血-缺氧性病引起的白质脑病、脑桥中央髓鞘溶解症、急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、营养缺乏性疾病引起的亚急性联合变性、病毒感染引起的亚急性硬化性全脑炎或进行性多灶性白质脑病、糖尿病性神经病、系统性红斑狼疮的神经病变、白质消融性疾病、肾上腺脑白质营养不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病；

所述髓鞘损伤疾病包括唐氏综合症、阿尔茨海默症、帕金森。

6.权利要求1-4任一项所述的制备少突胶质细胞的方法在用于促进神经干细胞分化为少突胶质细胞的用途。